磷酸戊糖途徑途徑中6-磷酸葡萄糖脫氫酶（6PGDH）和 6-磷酸葡萄糖酸脫氫酶（6PGDH）依次催化 NADPH 合成，與能量的平衡、生長速率和細胞活力等密切相關。此外，6PGDH 逆境生理中具有重要作用。本試劑盒提供了一種簡單的檢測方法，用于檢測生物樣本中6PGDH活性，其原理是6PGDH 催化6-磷酸葡萄糖酸和NADP+生成NADPH，NADPH在340nm有特征吸收峰，而 NADP+沒有；通過測定 340nm吸光度增加速率來計算6PGDH活性。
酶標儀或紫外分光光度計（能測340nm處的吸光度）
96孔UV微孔板或微量石英比色皿、可調節式移液槍及槍頭
恒溫箱、制冰機、低溫離心機
去離子水
勻漿器（如果是組織樣本）
提取液：即用型；4℃保存。
試劑一：即用型；使用前，平衡到室溫；4℃保存。
工作液配制：臨用前，將試劑二和試劑三轉移至試劑一中充分溶解；用不完的試劑分裝后-20℃保存，避免反復凍融。
組織：稱取0.1g組織樣本，加入1mL預冷的提取液，快速冰上勻漿。勻漿后的樣本，8,000g，4℃離心10min，取上清液，置冰上待測。
細胞或細菌：收集500萬細胞或細菌到離心管內，用冷PBS清洗細胞或細菌，離心后棄上清，加入1mL 預冷的提取液，冰浴超聲波破碎細胞或細菌5min（功率20％或200W，超聲3s，間隔7s，重復30次），然后8,000g，4℃離心10min，取上清液，置冰上待測。
血清（漿）等液體樣本：直接測定。
注意：推薦使用新鮮樣本，如果不立即進行實驗，樣本可在-80℃保存1個月，樣品處理等過程均需要在冰上進行，且須在當日測定酶活力，勻漿液避免反復凍融。如需測定蛋白濃度，推薦使用BCA法蛋白質定量試劑盒，進行樣本蛋白質濃度測定。
1. 酶標儀或紫外分光光度計預熱30min以上，調節波長到340nm，紫外分光光度計去離子水調零。
2. 工作液置于25℃（普通物種）或者 37℃（哺乳動物）中預熱30min。
3. 樣本測定：在96孔UV板或微量石英比色皿中依次加入10μL樣本，190μL工作液，迅速混勻，于340nm處測定3min內吸光值變化，第10s吸光值記為A1，孵育3min以后再測定第190s吸光值記為A2。△A=A2-A1
注意：
1. 實驗之前建議選擇 2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果△A小于0.001可適當加大樣本量。如果△A大于0.5，樣本可用提取液進一步稀釋，計算結果乘以稀釋倍數，或減少提取用樣本量。
2. 測定反應的溫度對測定結果有影響，請控制在25℃（一般物種）或者37℃（哺乳動物）。
3. 因通過反應速率計算酶活，使用96孔UV板時請根據操作速度控制一次測定的樣本數（通常一次測定4-8個樣本）。
A. 使用96孔UV微孔板測定的計算公式如下：
1. 按樣本鮮重計算
活力單位定義：一定溫度中，每g樣品在反應體系中每分鐘催化生成1nmol NADPH為1個酶活單位。
6PGDH（U/g 鮮重）=[△A×V反總÷(ε×d)×109]÷(V樣÷V樣總×W)÷T=2143.6×ΔA÷W
2. 按液體體積計算
活性單位定義：一定溫度中，每mL液體樣本在反應體系中每分鐘催化生成1nmol NADPH為1個酶活單位。6PGDH(U/mL)=[△A×V反總÷(ε×d)×109]÷V樣÷T=2143.6×ΔA
3. 按細胞數量計算
活力單位定義：一定溫度中，每104個細胞或細菌在反應體系中每分鐘催化生成1nmol NADPH為1個酶活單位。
6PGDH(U/104 Cells)=[△A×V反總÷(ε×d)×109]÷(500×V樣÷V樣總)÷T=2143.6×△A÷500=4.287×△A
（4）按蛋白濃度計算
活力單位定義：一定溫度中，每毫克蛋白在反應體系中每分鐘催化生成1nmol NADPH為1個酶活單位。
6PGDH(U/mg prot)=[△A×V反總÷(ε×d)×109]÷(Cpr×V樣)÷T=2143.6×△A÷Cpr
ε：NADPH摩爾消光系數，6.22×103L/mol/cm；d：96孔板光徑，0.5cm；V反總：反應體系總體積，200μL=2×10-4 L；109：1mol=1×109nmol；V樣：加入反應體系中樣本體積，10μL =0.01mL；V樣總：提取液體積，1mL；Cpr：上清液蛋白濃度mg/mL；W：樣品質量，g；T：反應時間，3min；500：細胞數量，500萬。
B. 使用微量石英比色皿進行測定的計算公式
將上述計算公式中光徑 d：0.5cm 調整為 d：1cm 進行計算即可。
1. 實驗過程中請穿戴實驗服、口罩和乳膠手套。請按照生物實驗室的國家安全規定進行實驗，尤其是在檢測血樣或其他體液時。
2. 本試劑盒僅用于實驗室科學研究，如果本試劑盒用于臨床診斷或任何其他用途，我們將不對任何后果負責。
3. 本試劑盒應在有效期內使用，并請嚴格按照說明書進行存儲。
4. 不同批次號、不同廠家之間的組分不要混用；否則，可能導致結果異常。
5. 勤換吸頭，避免各組分之間的交叉污染。
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