糖類物質是構成動植物體的重要成分之一,也是新陳代謝的主要原料和貯存物質。總糖主要指具有還原性的葡萄糖、果糖、乳糖,以及在測定條件下能水解為還原性單糖的蔗糖、麥芽糖和可能部分水解的淀粉。本試劑盒可檢測各種生物樣本中總糖含量,其原理是通過將總糖水解為還原糖,還原糖在堿性條件下與DNS試劑共熱后還原DNS生成氨基化合物,在堿性溶液中呈紅棕色,在540nm有特征吸收峰;在一定的濃度范圍內,還原糖含量與540nm吸光度成線性關系,根據標準曲線,即可計算出樣品中總糖含量。
酶標儀或可見分光光度計(能測540nm處的吸光度)以及水浴鍋
96孔板或微量玻璃比色皿、可調節式移液槍及槍頭
低溫離心機
去離子水
勻漿器(如果是組織樣本)
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答:可能的原因有:
1、目的蛋白有多個修飾位點,本身可以呈現多條帶,建議查閱文獻或進行生物信息學分析,獲得蛋白序列的修飾位點信息,通過去修飾確定蛋白實際大小;
2、樣本處理過程中目的蛋白發生降解,建議加入蛋白酶抑制劑;樣本處理時在冰上操作;
3、雜蛋白多,建議處理目的蛋白;
4、抗體特異性不強,建議使用特異性強的抗體;
5、抗體孵育時間過久,建議減少抗體孵育時間;
6、二抗與抗原有交叉反應,建議選擇合適的封閉物;
7、二聚體或多聚體存在,建議增加蛋白質變性過程及強度;
8、底物顯色與曝光時間過長,建議縮短顯色及曝光的時間。
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