β-1,4-葡聚糖酶/纖維二糖水解酶(C1,EC3.2.1.91)存在于細(xì)菌、真菌和動物體內(nèi),是纖維素酶系的組份之一,也是水解天然纖維素的必需組分。C1催化多聚糖鏈的末端非還原端水解β-葡萄糖苷鍵,每次切下1個纖維二糖分子,釋放出纖維二糖和葡萄糖。本試劑盒提供了一種簡單易用的比色法,用于分析生物樣品中C1的活性。其原理是C1可催化微晶纖維素降解產(chǎn)生還原糖,通過3,5-二硝基水楊酸法測定還原糖生成速率來計算其酶活性。
酶標(biāo)儀或可見光分光光度計(能測540nm處的吸光度)及水浴鍋
96孔板或微量玻璃比色皿、可調(diào)節(jié)式移液槍及槍頭
離心機、制冰機
去離子水
勻漿器(如果是組織樣本)
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答:可能的原因有:
1、目的蛋白有多個修飾位點,本身可以呈現(xiàn)多條帶,建議查閱文獻(xiàn)或進(jìn)行生物信息學(xué)分析,獲得蛋白序列的修飾位點信息,通過去修飾確定蛋白實際大小;
2、樣本處理過程中目的蛋白發(fā)生降解,建議加入蛋白酶抑制劑;樣本處理時在冰上操作;
3、雜蛋白多,建議處理目的蛋白;
4、抗體特異性不強,建議使用特異性強的抗體;
5、抗體孵育時間過久,建議減少抗體孵育時間;
6、二抗與抗原有交叉反應(yīng),建議選擇合適的封閉物;
7、二聚體或多聚體存在,建議增加蛋白質(zhì)變性過程及強度;
8、底物顯色與曝光時間過長,建議縮短顯色及曝光的時間。
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