黃嘌呤氧化酶(EC 1.17.3.2)或黃嘌呤氧化還原酶是人體中嘌呤分解代謝的末端酶,催化次黃嘌呤羥基化為黃嘌呤,然后催化生成尿酸。當(dāng)作為NADH氧化酶時(shí),XOD是超氧化物(O2-)的生成物,超氧化物(O2-)是一種強(qiáng)大的活性氧(ROS)。XOD也是核苷酸 代謝的關(guān)鍵酶之一。XOD主要分布于哺乳動(dòng)物的心、肺、肝臟等組織中,當(dāng)肝功能受損時(shí),XOD大量釋放到血清 中,對(duì)肝損害的診斷具有特異性的意義。本試劑盒提供一種簡(jiǎn)單易用的測(cè)定法,用于檢測(cè)各種生物樣本中XOD活性,其原理是XOD催化黃嘌呤產(chǎn)生超氧陰離子,超氧陰離子與鹽酸羥胺反應(yīng)生成NO2-,NO2-在對(duì)氨基苯磺酰胺和萘乙二胺鹽酸鹽的作用下,生成紅色的偶氮化合物,在540nm處有特征吸收峰,根據(jù)其生成量可反映XOD活性的大小。
酶標(biāo)儀或可見分光光度計(jì)(能測(cè)540nm處的吸光度)及水浴鍋
96孔板或微量玻璃比色皿、可調(diào)節(jié)式移液槍及槍頭
低溫離心機(jī)、制冰機(jī)
去離子水
勻漿器(如果是組織樣本)
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答:可能的原因有:
1、膠濃度不對(duì),不同濃度的膠跑出的蛋白條帶的位置可能有所偏差,可以調(diào)整濃度;
2、抗體孵育不充分,建議增加抗體濃度,延長(zhǎng)孵育時(shí)間;
3、酶失活,建議直接將酶和底物進(jìn)行混合,如果不顯色則說明酶失活了。選擇在有效期內(nèi)、有活性的酶聯(lián)物;
4、目的蛋白存在翻譯后修飾或剪切體,建議查詢相關(guān)文獻(xiàn)確定;
5、標(biāo)本中不含靶蛋白或靶蛋白含量太低,建議設(shè)置陽性對(duì)照比對(duì)結(jié)果,增加標(biāo)本上樣量。
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