蔗糖轉(zhuǎn)化酶（Invertase，Ivr）催化蔗糖不可逆地分解為果糖和葡萄糖，是高等植物蔗糖代謝關(guān)鍵酶之一。根據(jù)適 pH，Ivr分為酸性轉(zhuǎn)化酶（AI）和中性轉(zhuǎn)化酶（NI）兩種類型。AI的適pH為3～5。AI根據(jù)亞細胞定位的差異又可分為可溶性AI(S-AI)和細胞壁不溶性AI（B-AI）兩種類型。B-AI存在于細胞間隙并以離子鍵的形式結(jié)合在細胞壁上，主要參與韌皮部質(zhì)外體卸載時蔗糖的分解，以維持庫源之間蔗糖的濃度，在植物的生長發(fā)育以及抵抗各種脅迫中起著重要作用。本試劑盒提供了一種檢測B-AI活性的便捷方法，其原理是B-AI催化蔗糖降解產(chǎn)生還原糖，進一步與3,5－二硝基水楊酸反應(yīng)，生成棕紅色氨基化合物，在540nm有特征光吸收，在一定范圍內(nèi)540nm光吸收值與還原糖生成量成正比。通過光吸收增加速率來計算B-AI活性.
酶標儀或可見光分光光度計（能測540nm處的吸光度）
水浴鍋、制冰機、低溫離心機
96孔板或微量玻璃比色皿、可調(diào)節(jié)式移液槍及槍頭
去離子水
勻漿器
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答：可能的原因有：
1、目的蛋白有多個修飾位點，本身可以呈現(xiàn)多條帶，建議查閱文獻或進行生物信息學(xué)分析，獲得蛋白序列的修飾位點信息，通過去修飾確定蛋白實際大小；
2、樣本處理過程中目的蛋白發(fā)生降解,建議加入蛋白酶抑制劑；樣本處理時在冰上操作；
3、雜蛋白多，建議處理目的蛋白；
4、抗體特異性不強，建議使用特異性強的抗體；
5、抗體孵育時間過久，建議減少抗體孵育時間；
6、二抗與抗原有交叉反應(yīng)，建議選擇合適的封閉物；
7、二聚體或多聚體存在，建議增加蛋白質(zhì)變性過程及強度；
8、底物顯色與曝光時間過長，建議縮短顯色及曝光的時間。
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