AAT是一個(gè)多功能蛋白大家族，主要負(fù)責(zé)催化生物體內(nèi)各種酰基化和去酰基化反應(yīng)，在基因表達(dá)、代謝和信號(hào)傳導(dǎo)中具有重要作用。本試劑盒可檢測(cè)生物體內(nèi)AAT活性，其原理是：AAT催化乙酰CoA轉(zhuǎn)移乙酰基到丁醇，同時(shí)還原DTNB生成TNB；TNB在412nm有吸收峰，測(cè)定412nm吸光度增加速率，來(lái)計(jì)算AAT活性。
酶標(biāo)儀或可見分光光度計(jì)（能測(cè)412nm處的吸光度）
96孔板或微量玻璃比色皿、可調(diào)節(jié)式移液槍及槍頭
恒溫箱、制冰機(jī)、低溫離心機(jī)
無(wú)水乙醇
勻漿器（如果是組織樣本）
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答：可能的原因有：
1、膜沒有完全均勻濕透,建議 使用100% methanol浸透膜；
2、洗膜不充分，可以增加洗液體積和洗滌次數(shù)；
3、電極不平衡或者加樣位置偏斜，可以調(diào)整電極和加樣；
4、封閉物用量不足，可以提高封閉物濃度，孵育時(shí)保證封閉液完全浸沒轉(zhuǎn)印膜；
5、封閉物使用不當(dāng)，比如檢測(cè)生物素標(biāo)記的蛋白時(shí)不可用脫脂奶粉封閉；
6、封閉時(shí)間不夠，一般情況下室溫37度封閉1小時(shí)以上或者4度封閉過夜；
7、抗體非特異性結(jié)合，可以降低抗體濃度，減少孵育時(shí)間；
8、一抗稀釋度不適宜，可以對(duì)抗體進(jìn)行滴度測(cè)試，選擇適宜的抗體稀釋度；
9、一抗孵育的溫度偏高，建議4℃結(jié)合過夜；
10、抗體濃度過高或洗滌不夠，建議降低抗體濃度，增加洗滌次數(shù)和時(shí)間；
11、化學(xué)顯色底物過多，建議按說(shuō)明書加入適量的顯色底物。
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