總膽固醇(TC)包括游離膽固醇和膽固醇酯。組織總膽固醇(TC)是指組織中所有脂蛋白所含膽固醇之總和。本試劑盒提供了一種簡單的檢測方法,用于檢測生物樣本如動物組織、細胞、細菌、血清(漿)中總膽固醇(TC)的含量水平。其原理是利用酯酶催化膽固醇酯水解生成游離膽固醇(FC)和游離脂肪酸(FFA),從而把膽固醇酯轉化為FC;進一步利用膽固醇氧化酶催化FC氧化,生成△4-膽甾烯酮和H2O2;后利用過氧化物酶催化H2O2氧化4-氨基安替比林和酚,生成紅色醌類化合物;在500nm有特征吸收峰,其顏色深淺與TC含量成正比。
酶標儀或可見分光光度計(能測500nm處的吸光度)
恒溫箱、制冰機、低溫離心機
96孔板或微量玻璃比色皿、可調節式移液槍及槍頭
異丙醇、去離子水
勻漿器(如果是組織樣本)
更新中...
答:可能的原因有:
1、膠濃度不對,不同濃度的膠跑出的蛋白條帶的位置可能有所偏差,可以調整濃度;
2、抗體孵育不充分,建議增加抗體濃度,延長孵育時間;
3、酶失活,建議直接將酶和底物進行混合,如果不顯色則說明酶失活了。選擇在有效期內、有活性的酶聯物;
4、目的蛋白存在翻譯后修飾或剪切體,建議查詢相關文獻確定;
5、標本中不含靶蛋白或靶蛋白含量太低,建議設置陽性對照比對結果,增加標本上樣量。
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