β-羥基丁酸(β-HB;3-羥基丁酸)是酮體(或含有酮基的水溶性分子)的一種,主要在肝臟中由脂肪酸氧化產(chǎn)生,并輸出到外周組織,作為能量來(lái)源。脂肪酸在肝內(nèi)正常分解代謝后所產(chǎn)生的酮體,分為乙酰乙酸,β-羥基丁酸和丙酮。這三類(lèi)物質(zhì)互相轉(zhuǎn)換,性質(zhì)大致相同,但代謝途徑卻不一樣。β-HB和乙酰乙酸將能量從肝臟輸送到其他組織。β-羥基丁酸占酮體總量的78%,主要存在于血液中。乙酰乙酸占酮體總量的20%,可以由尿液排出,也可轉(zhuǎn)變?yōu)楸舫觥1纪w總量的2%,容易揮發(fā),可通過(guò)呼吸尿液等排出體外。β-HB可在食物攝入量少、低碳水化合物飲食、高脂肪飲食、饑餓和長(zhǎng)期劇烈運(yùn)動(dòng)期間產(chǎn)生。β-羥基丁酸的測(cè)定在糖尿病酮癥的診斷、治療監(jiān)測(cè)中比乙酰乙酸測(cè)定更靈敏,更可靠,同樣在糖尿病控制的預(yù)告中也非常有價(jià)值。本試劑盒提供了一種簡(jiǎn)單易用的比色法,用于分析各種生物樣品中β-HB含量。其原理是β-HB被β-羥丁酸脫氫酶(β-HBDH)氧化,產(chǎn)生乙酰乙酸,伴隨這個(gè)反應(yīng)過(guò)程,NAD+被還原為NADH,NADH將WST-8還原生成橙黃色formazan(甲臜),在450nm左右檢測(cè)有大吸收峰。通過(guò)測(cè)定450nm下吸光度變化來(lái)計(jì)算β-HB含量。
酶標(biāo)儀或可見(jiàn)光分光光度計(jì)(能測(cè)450nm處的吸光度)
恒溫箱、制冰機(jī)、低溫離心機(jī)
96孔板或微量玻璃比色皿、可調(diào)節(jié)式移液槍及槍頭
去離子水
勻漿器(如果是組織樣本)
1. 實(shí)驗(yàn)過(guò)程中請(qǐng)穿戴實(shí)驗(yàn)服、口罩和乳膠手套。請(qǐng)按照生物實(shí)驗(yàn)室的國(guó)家安全規(guī)定進(jìn)行實(shí)驗(yàn),尤其是在檢測(cè)血樣或其他體液時(shí)。
2. 本試劑盒僅用于實(shí)驗(yàn)室科學(xué)研究,如果本試劑盒用于臨床診斷或任何其他用途,我們將不對(duì)任何后果負(fù)責(zé)。
3. 本試劑盒應(yīng)在有效期內(nèi)使用,并請(qǐng)嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)進(jìn)行存儲(chǔ)。
4. 不同批次號(hào)、不同廠家之間的組分不要混用;否則,可能導(dǎo)致結(jié)果異常。
5. 勤換吸頭,避免各組分之間的交叉污染。
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答:可能的原因有:
1、膠濃度不對(duì),不同濃度的膠跑出的蛋白條帶的位置可能有所偏差,可以調(diào)整濃度;
2、抗體孵育不充分,建議增加抗體濃度,延長(zhǎng)孵育時(shí)間;
3、酶失活,建議直接將酶和底物進(jìn)行混合,如果不顯色則說(shuō)明酶失活了。選擇在有效期內(nèi)、有活性的酶聯(lián)物;
4、目的蛋白存在翻譯后修飾或剪切體,建議查詢相關(guān)文獻(xiàn)確定;
5、標(biāo)本中不含靶蛋白或靶蛋白含量太低,建議設(shè)置陽(yáng)性對(duì)照比對(duì)結(jié)果,增加標(biāo)本上樣量。
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