中性蛋白酶(Neutral protease, NP)在一定的溫度和中性pH條件下,催化水解蛋白質。由于其安全無毒、水解能力強、作用范圍廣等特點,中性蛋白酶常用于食品、飼料、化妝品和營養保健品生產。本試劑盒提供了一種簡單、快速的中性蛋白酶檢測方法,其檢測原理是:中性條件下,NP催化酪蛋白水解產生酪氨酸;在堿性條件下,酪氨酸還原磷鉬酸化合物生成鎢藍;在680nm有特征吸收峰。通過測定其吸光度增加,來計算NP活性。
酶標儀或可見光分光光度計(能測680nm處的吸光度)
水浴鍋、制冰機、低溫離心機
96孔板或微量玻璃比色皿、可調節式移液槍及槍頭
去離子水
勻漿器
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答:可能的原因有:
1、膠濃度不對,不同濃度的膠跑出的蛋白條帶的位置可能有所偏差,可以調整濃度;
2、抗體孵育不充分,建議增加抗體濃度,延長孵育時間;
3、酶失活,建議直接將酶和底物進行混合,如果不顯色則說明酶失活了。選擇在有效期內、有活性的酶聯物;
4、目的蛋白存在翻譯后修飾或剪切體,建議查詢相關文獻確定;
5、標本中不含靶蛋白或靶蛋白含量太低,建議設置陽性對照比對結果,增加標本上樣量。
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