胰蛋白酶(EC 3.4.4.4),是蛋白酶的一種,從牛、羊、豬的胰臟提取的一種絲氨酸蛋白水解酶。在脊椎動物中,作為消化酶而起作用。胰蛋白酶選擇性水解變性蛋白質中由賴氨酸或精氨酸的羧基所構成的肽鏈,是一種重要的消化酶。此外,胰蛋白酶還廣泛應用于膿胸、血胸、外科炎癥、潰瘍、創傷性損傷等所產生的局部水腫、血腫及膿腫等的輔助治療。本試劑盒提供了一種簡單、快速的胰蛋白酶檢測方法,其檢測原理是:胰蛋白酶催化水解TAME的酯鍵,釋放出的游離羧基與反應體系中的氫氧化鈉發生中和反應,導致溶液的pH值降低,以苯酚紅為指示劑,測定溶液在555nm處吸收值的變化,可以快速測得胰蛋白酶活性數據。胰蛋白酶活性在一定范圍內與555nm處吸收值的降低呈良好的線性關系。
酶標儀或可見光分光光度計(能測555nm處的吸光度)
恒溫箱、制冰機、低溫離心機
96孔板或微量玻璃比色皿、可調節式移液槍及槍頭
去離子水
勻漿器
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答:可能的原因有:
1、膠濃度不對,不同濃度的膠跑出的蛋白條帶的位置可能有所偏差,可以調整濃度;
2、抗體孵育不充分,建議增加抗體濃度,延長孵育時間;
3、酶失活,建議直接將酶和底物進行混合,如果不顯色則說明酶失活了。選擇在有效期內、有活性的酶聯物;
4、目的蛋白存在翻譯后修飾或剪切體,建議查詢相關文獻確定;
5、標本中不含靶蛋白或靶蛋白含量太低,建議設置陽性對照比對結果,增加標本上樣量。
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