維生素B1(Vitamin B1)又稱硫胺素,是構(gòu)成脫羧輔酶的主要成分,以輔酶形式參與糖的分解代謝。參與細(xì)胞代謝中的三羧酸循環(huán),是維持機(jī)體正常代謝必須的水溶性維生素,在生物體能量代謝中有重要的作用。本試劑盒提供了一種簡(jiǎn)單易用的比色法,用于分析各種生物樣品中維生素 B1含量。其原理是VB1在堿性條件下還原鐵氰化鉀生成亞鐵氰化鉀,亞鐵氰化鉀與Fe3+在弱酸條件下生成普魯士藍(lán),在704nm有特征吸收峰。測(cè)定布魯士藍(lán)在704nm下的特征吸收峰,即可反映VB1的含量。
酶標(biāo)儀或可見(jiàn)光分光光度計(jì)(能測(cè)704nm處的吸光度)及水浴鍋
96孔板或微量玻璃比色皿、可調(diào)節(jié)式移液槍及槍頭
離心機(jī)
去離子水
勻漿器(如果是組織樣本)
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答:可能的原因有:
1、膜沒(méi)有完全均勻濕透,建議 使用100% methanol浸透膜;
2、洗膜不充分,可以增加洗液體積和洗滌次數(shù);
3、電極不平衡或者加樣位置偏斜,可以調(diào)整電極和加樣;
4、封閉物用量不足,可以提高封閉物濃度,孵育時(shí)保證封閉液完全浸沒(méi)轉(zhuǎn)印膜;
5、封閉物使用不當(dāng),比如檢測(cè)生物素標(biāo)記的蛋白時(shí)不可用脫脂奶粉封閉;
6、封閉時(shí)間不夠,一般情況下室溫37度封閉1小時(shí)以上或者4度封閉過(guò)夜;
7、抗體非特異性結(jié)合,可以降低抗體濃度,減少孵育時(shí)間;
8、一抗稀釋度不適宜,可以對(duì)抗體進(jìn)行滴度測(cè)試,選擇適宜的抗體稀釋度;
9、一抗孵育的溫度偏高,建議4℃結(jié)合過(guò)夜;
10、抗體濃度過(guò)高或洗滌不夠,建議降低抗體濃度,增加洗滌次數(shù)和時(shí)間;
11、化學(xué)顯色底物過(guò)多,建議按說(shuō)明書(shū)加入適量的顯色底物。
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