順烏頭酸酶(Aconitase,ACO;EC 4.2.1.3),一種含Fe-S簇的酶,在三羧酸循環中,催化從檸檬酸經順烏頭酸生成異檸檬酸的可逆性異構化,對維持三羧酸循環及乙醛酸循環的順利進行起著重要作用。?真核細胞中ACO主要存在于胞漿與線粒體中,細菌中也含有ACO。檸檬酸本身不易氧化,在順烏頭酸酶作用下,通過脫水與加水反應,使羥基由β碳原子轉移到α碳原子上,生成易于脫氫氧化的異檸檬酸,為進一步的氧化脫羧反應作準備。本試劑盒提供了一種簡單、方便、快速的ACO活性檢測方法,其原理是ACO催化檸檬酸轉化成異檸檬酸,異檸檬酸氧化脫羧將NAD+還原生成NADH,導致340nm處光吸收上升,根據NADH的生成速率可計算獲得順烏頭酸酶的活性。
酶標儀或紫外分光光度計(能測340nm處的吸光度)
96孔UV板或微量石英比色皿、可調節式移液槍及槍頭
水浴鍋、制冰機,低溫離心機
去離子水
勻漿器(如果是組織樣本)
更新中...
答:一般5×10^6就足夠。
答:可能的原因有:
1、細胞中不表達這種蛋白質,換一種細胞;
2、抗體不能識別目標蛋白,多看看說明,是否有問題;
3、可能是沒有保持低溫操作,樣品保存不當,樣品放置時間過長;
4、細胞中的蛋白質被酶降解掉了,可加入蛋白酶抑制劑,抑制蛋白酶活性。
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