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SDS-PAGE蛋白上樣緩沖液(SDS-PAGE Sample Loading Buffer，2X)，是一種經過改良的以溴酚藍為染料，2倍濃縮的蛋白上樣緩沖液，可以用于常規的SDS-PAGE蛋白樣品的上樣。

1.在室溫或不超過37℃的水浴中溶解SDS-PAGE蛋白上樣緩沖液(2X)。水浴溶解后立即室溫存放，盡量避免長時間置于水浴中。

2.按照每1ul蛋白樣品加入1ul蛋白上樣緩沖液(2X)的比例，混合蛋白樣品和蛋白上樣緩沖液(2X)。

3.100℃或沸水浴加熱3-5分鐘，以充分變性蛋白。

注意：如果起始時細胞或組織的用量較大，基因組DNA含量較高，煮沸3-5分鐘后有可能仍然比較粘稠或者有粘稠狀的半透明物體。此時需要再煮沸5-10分鐘或者加入適量稀釋成1X的蛋白上樣緩沖液后再煮沸3-5分鐘。充分煮沸后一方面可以使結合在基因組DNA上的蛋白充分釋放，同時會導致基因組DNA的部分斷裂從而使粘稠感消失，這樣就不會影響后續的上樣操作了。

4.冷卻到室溫后，直接上樣到SDS-PAGE膠加樣孔內即可。

5.通常電泳至藍色染料到達膠的底端處附近即可停止電泳。

SDS-PAGE蛋白上樣緩沖液(2X)必須完全溶解后再使用。