過硫酸銨(Ammonium persulfate,AP或APS)分子式為(NH4)2S2O8,分子量為228.20,純度>98%,用于配制PAGE膠等。過硫酸銨溶液(AP,10%)在室溫下不穩定,4℃可以保存1周,-20℃可以保存3個月。
1、 配制好的10%過硫酸銨在室溫下不穩定,-20℃可以保存3個月。
2、 注意避免反復凍融,可先分裝成小分,使用一次即丟棄。
3、 另外凝膠凝聚的速度和溫度及光照關系密切,可通過適當調節APS的用量,控制在不同的環境下凝膠凝聚的速度。
4、 為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。
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答:可能的原因有:
1、目的蛋白有多個修飾位點,本身可以呈現多條帶,建議查閱文獻或進行生物信息學分析,獲得蛋白序列的修飾位點信息,通過去修飾確定蛋白實際大小;
2、樣本處理過程中目的蛋白發生降解,建議加入蛋白酶抑制劑;樣本處理時在冰上操作;
3、雜蛋白多,建議處理目的蛋白;
4、抗體特異性不強,建議使用特異性強的抗體;
5、抗體孵育時間過久,建議減少抗體孵育時間;
6、二抗與抗原有交叉反應,建議選擇合適的封閉物;
7、二聚體或多聚體存在,建議增加蛋白質變性過程及強度;
8、底物顯色與曝光時間過長,建議縮短顯色及曝光的時間。
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