TEMED,即四甲基乙二胺,英文名N,N,N’,N’-Tetramethylethylenediamine。TEMED是聚丙烯酰胺凝膠聚合的重要催化劑,在制備聚丙烯酰胺凝膠時(shí),TEMED配合過硫酸銨(AP)使用,通過催化AP產(chǎn)生自由基,加速催化聚丙烯酰胺的聚合反應(yīng)。
4℃避光保存,有效期2年。
按實(shí)驗(yàn)具體要求操作
為了您的安全和健康,請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作,做好防護(hù),防止吸入。
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答:可能的原因有:
1、目的蛋白有多個(gè)修飾位點(diǎn),本身可以呈現(xiàn)多條帶,建議查閱文獻(xiàn)或進(jìn)行生物信息學(xué)分析,獲得蛋白序列的修飾位點(diǎn)信息,通過去修飾確定蛋白實(shí)際大小;
2、樣本處理過程中目的蛋白發(fā)生降解,建議加入蛋白酶抑制劑;樣本處理時(shí)在冰上操作;
3、雜蛋白多,建議處理目的蛋白;
4、抗體特異性不強(qiáng),建議使用特異性強(qiáng)的抗體;
5、抗體孵育時(shí)間過久,建議減少抗體孵育時(shí)間;
6、二抗與抗原有交叉反應(yīng),建議選擇合適的封閉物;
7、二聚體或多聚體存在,建議增加蛋白質(zhì)變性過程及強(qiáng)度;
8、底物顯色與曝光時(shí)間過長,建議縮短顯色及曝光的時(shí)間。
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