彩色預染蛋白Marker(8- 180kDa)包含了從8kDa到180kDa共10種高度純化并預染的重組蛋白質(8,17,25,33,43,55, 72,100,130, 180kDa) ,其中72kDa條帶為橙紅色,8kDa為綠色,其余條帶為藍色。本產品預染蛋白表觀分子量經過thermo26610和26614非預染蛋白質分子量標準標定,適合作為SDS-PAGE和Western的蛋白質分子量標準,可用于監測電泳過程中蛋白分離效果,檢驗Western轉膜(PVDF ,尼龍膜或 NC膜)效果,判斷蛋白的分子量大小。
本彩色預染蛋白Marker已經配制在1x SDS-PAGE上樣緩沖液中,可直接上樣使用,不需要煮沸、稀釋和加入還原劑處理。
62.5mM Tris-H3PO4(pH7.5) ,2mM EDTA ,2% (W/V) SDS ,33% (V/V) Glycerol ,5mM DTT, 0.02% (V/V) proclin300。
(1) 室溫下解凍后完全溶解并輕輕充分混勻后使用,不要煮沸;
(2) 取本產品5ul與實驗樣品同時進行聚丙烯酰胺凝膠電泳;建議有條件的實驗室在初次使用本產品時可以根 據自身的實驗條件和實驗習慣通過預實驗確定合適的上樣量,這樣可以節約成本,同時獲得效果更佳的實驗圖片;
(3) 根據上樣孔的大小,本產品通常每次上樣5- 10ul(5x1.5mm膠孔5ul 足夠) ,即可在電泳時、 電泳后和轉膜后觀察到非常清楚的蛋白條帶;
(4) 未使用的彩色預染蛋白Marker保存于儲存條件,在 4℃可放置 2 個月。
(1) 為避免反復凍融及污染,可將本產品分裝后,-20℃保存。
(2) 電泳時間不宜過長,長時間可能導致蛋白條帶出現彌散現象。
(3) 在低濃度膠時,低分子量蛋白會泳動于染料前緣。
(4) 大分子量蛋白Western blot時需要延長轉膜時間或加高轉膜電壓,另外建議轉膜液不添加SDS,若實驗必須使用,建議SDS濃度不要超過0.02-0.04%。
(5) 預染蛋白質在不同的緩沖體系下有不同的表觀分子量,可在該緩沖體系中事先用非預染蛋白質分子量標準校正,并按校正后的結果正常使用。
(6) 為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。
(7) 本產品僅限于專業人員的科學研究用,不得用于臨床診斷或治療,不得用于食品或藥品,不得存放于普通住宅內。
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答:可能的原因有:
1、膠濃度不對,不同濃度的膠跑出的蛋白條帶的位置可能有所偏差,可以調整濃度;
2、抗體孵育不充分,建議增加抗體濃度,延長孵育時間;
3、酶失活,建議直接將酶和底物進行混合,如果不顯色則說明酶失活了。選擇在有效期內、有活性的酶聯物;
4、目的蛋白存在翻譯后修飾或剪切體,建議查詢相關文獻確定;
5、標本中不含靶蛋白或靶蛋白含量太低,建議設置陽性對照比對結果,增加標本上樣量。
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