使用本試劑盒,采用常規染色脫色方法累計時間達到2-3小時后可以觀察到蛋白條帶;采用快速染色脫色方法20分鐘左右即可觀察到蛋白條帶。觀察到清晰的蛋白條帶則需染色脫色更長時間。本試劑盒中的染色液和脫色液經過改良,不含有毒的甲醇,但含有刺激性氣味的乙酸
1. 常規染色脫色方法:
a. 電泳結束后,取凝膠放入適量考馬斯亮藍染色液中,確保染色液可以充分覆蓋凝膠。
b. 置于水平搖床或側擺搖床上緩慢搖動,室溫染色1小時或更長時間。具體的染色時間取決于凝膠的厚度和染色時的溫度。
c. 倒出染色液。染色液可以回收重復使用至少2-3次。
d. 加入適量考馬斯亮藍染色脫色液,確保脫色液可以充分覆蓋凝膠。
e. 置于水平搖床或側擺搖床上緩慢搖動,室溫脫色4-24小時。期間更換脫色液2-4次,直至藍色背景基本上全部被脫去,并且蛋白條帶染色效果達到預期。通常蛋白條帶在脫色1-2小時后即可出現。
f. 完成脫色后,可以把凝膠保存在水中,用于后續的拍照等。保存在水中的凝膠會發生溶漲。如需避免溶漲,可以把膠保存在含20%甘油的水中。長期保存可以制備干膠。
2. 快速染色脫色方法:
a. 電泳結束后,取膠放入適量考馬斯亮藍染色液中,微波爐加熱至接近沸騰或剛剛沸騰,立即停止加熱。
通常對于膠濃度大于10%的膠比較堅韌,在發生煮沸時不易破損;對于膠濃度小于10%的膠,宜盡量避免煮沸,以免出現膠碎裂的情況。
b. 隨后在染色液溫度較高的情況下,在室溫搖床上搖動5-10分鐘。
c. 倒出染色液。染色液可以回收重復使用至少2-3次。
d. 加入適量考馬斯亮藍染色脫色液,確保染色液可以充分覆蓋凝膠。
e. 微波爐加熱至接近沸騰或剛剛沸騰,立即停止加熱。
f. 隨后在脫色液溫度較高的情況下,在搖床上搖動5-10分鐘。此時通常可以觀察到比較清楚的蛋白條帶。
g. 更換新鮮的脫色液,重復步驟e和步驟f,直至藍色背景基本上全部被脫去,蛋白條帶染色效果達到預期。
h. 完成脫色后,可以把凝膠保存在水中,用于后續的拍照等。保存在水中的凝膠會發生溶漲。如需避免溶漲,可以把膠保存在含20%甘油的水中。長期保存可以制備干膠。
1.可以使用槍頭盒或適當大小的培養皿作為染色和脫色的容器。
2.本染色液和脫色液呈酸性,有輕微腐蝕性,使用時請作必要防護
3.為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。
4.本產品僅限于專業人員的科學研究用,不得用于臨床診斷或治療,不得用于食品或藥品,不得存放于普通住宅內。
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答:可能的原因有:
1、膠濃度不對,不同濃度的膠跑出的蛋白條帶的位置可能有所偏差,可以調整濃度;
2、抗體孵育不充分,建議增加抗體濃度,延長孵育時間;
3、酶失活,建議直接將酶和底物進行混合,如果不顯色則說明酶失活了。選擇在有效期內、有活性的酶聯物;
4、目的蛋白存在翻譯后修飾或剪切體,建議查詢相關文獻確定;
5、標本中不含靶蛋白或靶蛋白含量太低,建議設置陽性對照比對結果,增加標本上樣量。
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