本產(chǎn)品轉(zhuǎn)膜快速，安全無毒害。使用本快速轉(zhuǎn)膜液時(shí)，在400mA恒流轉(zhuǎn)膜約20-25分鐘即可將聚丙烯酰胺凝膠上的蛋白轉(zhuǎn)移至PVDF膜或硝酸纖維素膜(NC膜)等印跡膜上，并且產(chǎn)熱少，轉(zhuǎn)膜效果好。而相同的條件下使用傳統(tǒng)的轉(zhuǎn)膜液需要轉(zhuǎn)膜更長(zhǎng)時(shí)間。本產(chǎn)品為預(yù)混液，使用前只需要用水和乙醇配制，但無需調(diào)節(jié)pH值和使用劇毒的甲醇等試劑。本產(chǎn)品適合手工配制的Tris-Gly和Hepes等緩沖系統(tǒng)的SDS-PAGE凝膠的轉(zhuǎn)膜，也適合Tris-Gly、Hepes和Bis-Tris系統(tǒng)等預(yù)制膠的轉(zhuǎn)膜，使用后轉(zhuǎn)膜液可以回收，回收后可以再使用1-2次。
a. 取Western 快速轉(zhuǎn)膜液(10×)100ml倒入到潔凈的容器中，然后加入100ml 無水乙醇，后再補(bǔ)充去離子水或蒸餾水800ml定容至1L，混勻后即得到1×的Western快速轉(zhuǎn)膜液；
b. 如果Western快速轉(zhuǎn)膜液使用前 4℃預(yù)冷，轉(zhuǎn)膜效果更好。沒有用完的快速轉(zhuǎn)膜液可在常溫或 4℃保存，通常兩周內(nèi)可以正常使用。當(dāng)轉(zhuǎn)膜液顏色變?yōu)闇\棕色或黃褐色時(shí)，應(yīng)該丟棄。
c. 400mA 恒流，20-25 分鐘完成轉(zhuǎn)膜，推薦使用恒流轉(zhuǎn)膜。對(duì)于大分子量蛋白，可適當(dāng)增加轉(zhuǎn)膜時(shí)間。由于使用本產(chǎn)品時(shí)產(chǎn)熱少，轉(zhuǎn)膜時(shí)可以僅在轉(zhuǎn)膜槽內(nèi)用冰盒降溫即可。如果同時(shí)將整個(gè)轉(zhuǎn)膜槽置于冰浴中降溫，轉(zhuǎn)膜效果更佳。
1.如果轉(zhuǎn)膜液顏色變成淺棕色或黃褐色，應(yīng)該丟棄。
2.由于使用本產(chǎn)品時(shí)產(chǎn)熱較少，轉(zhuǎn)膜時(shí)可以僅在轉(zhuǎn)膜槽內(nèi)用冰盒降溫即可。如果同時(shí)將整個(gè)轉(zhuǎn)膜槽置于冰浴 中降溫，轉(zhuǎn)膜效果更佳。同時(shí)也可以考慮轉(zhuǎn)膜液配制好后先在 4℃或者冰浴預(yù)冷。
3.使用本產(chǎn)品轉(zhuǎn)膜時(shí)，如果設(shè)定恒流為 400mA，無論是同一個(gè)轉(zhuǎn)膜槽中 1 或 2 塊膠轉(zhuǎn)膜，電壓在開始時(shí)通常為200V 左右。由于轉(zhuǎn)膜過程中，轉(zhuǎn)膜液溫度會(huì)逐漸升高，電阻變小，所以結(jié)束時(shí)電壓通常為100-150V。轉(zhuǎn)膜效率和電場(chǎng)強(qiáng)度(electric field strength,用 E 表示)相關(guān)，而電場(chǎng)強(qiáng)度主要和電壓及電極之間的距離相關(guān)，即 E=U/d。
4.由于用于轉(zhuǎn)膜的電源品牌和型號(hào)的不同，一方面高電流差異較大，另一方面功率也會(huì)有較大差別。通常大功率的電源相對(duì)貴一些，也更適合用于轉(zhuǎn)膜。有些電源會(huì)自動(dòng)降低電壓或電流，有些則會(huì)報(bào)錯(cuò)并停止轉(zhuǎn)膜。對(duì)于出現(xiàn)停止轉(zhuǎn)膜的情況，需要調(diào)低電流或電壓，或者選擇功率更大的電源。
5.轉(zhuǎn)膜時(shí)轉(zhuǎn)膜液的溫度、凝膠的參數(shù)(如數(shù)量、厚度、離子濃度、丙烯酰胺濃度等)、濾紙的厚度、同時(shí)使用 的轉(zhuǎn)膜槽數(shù)量、轉(zhuǎn)膜液的離子濃度、轉(zhuǎn)膜液的體積、轉(zhuǎn)膜液使用的次數(shù)等都可能會(huì)影響電流和電壓。如果需 要同時(shí)使用 2 個(gè)或以上的轉(zhuǎn)膜槽，建議使用高電流的大功率電源，或者設(shè)定較低的電流或電壓進(jìn)行比較長(zhǎng)時(shí) 間的轉(zhuǎn)膜。
6.轉(zhuǎn)膜時(shí)，如果出現(xiàn)報(bào)錯(cuò)而停止，需要根據(jù)情況查看是否是電壓或電流過載，或者是如轉(zhuǎn)膜液過多或過少、 轉(zhuǎn)膜槽的短路或斷路等異常情況。
7.本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
8.為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
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答：可能的原因有：
1、目的蛋白有多個(gè)修飾位點(diǎn)，本身可以呈現(xiàn)多條帶，建議查閱文獻(xiàn)或進(jìn)行生物信息學(xué)分析，獲得蛋白序列的修飾位點(diǎn)信息，通過去修飾確定蛋白實(shí)際大小；
2、樣本處理過程中目的蛋白發(fā)生降解,建議加入蛋白酶抑制劑；樣本處理時(shí)在冰上操作；
3、雜蛋白多，建議處理目的蛋白；
4、抗體特異性不強(qiáng)，建議使用特異性強(qiáng)的抗體；
5、抗體孵育時(shí)間過久，建議減少抗體孵育時(shí)間；
6、二抗與抗原有交叉反應(yīng)，建議選擇合適的封閉物；
7、二聚體或多聚體存在，建議增加蛋白質(zhì)變性過程及強(qiáng)度；
8、底物顯色與曝光時(shí)間過長(zhǎng)，建議縮短顯色及曝光的時(shí)間。
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