TMB顯色液(組化或膜HRP顯色用)(TMB Chromogen Solution, TMB Substrate Solution or TMB Solution for Immunohistochemistry or Blotting)是一種采用了新單一溶液TMB顯色技術,通過辣根過氧化物酶(HRP)催化TMB顯色,用于免疫組化、原位雜交或膜顯色等的顯色液。本顯色液也可以用于原位檢測細胞或組織內(nèi)源性的過氧化物酶。
通常的TMB顯色試劑由多個組份組成,必須在使用前進行配制,并且容易產(chǎn)生沉淀,使用相對不太方便,并且也容易導致結(jié)果不太穩(wěn)定。本TMB顯色液采用了新的TMB顯色技術,把所有的相關試劑全部配制在一個溶液中,僅由單一溶液組成,簡化了操作步驟,并且使檢測結(jié)果更加穩(wěn)定可靠。
TMB,即3,3′,5,5′-Tetramethylbenzidine,是辣根過氧化物酶的常用底物。在辣根過氧化物酶或其他適當過氧化物酶的催化下,TMB會產(chǎn)生可溶性藍色產(chǎn)物。藍色產(chǎn)物通常可以在370nm或620-650nm測定吸光度。
本產(chǎn)品適用于 ELISA 檢測時,每個樣品通常使用 0.1ml 顯色液,每 100ml 本產(chǎn)品共可以檢測約 1000 個樣品。
TMB對人體有刺激性,請注意適當防護。
本產(chǎn)品為無色至微藍色透明溶液,如果發(fā)現(xiàn)TMB辣根過氧化物酶顯色液出現(xiàn)混濁或顏色變成較深的藍色,應該停止使用。
本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學研究用,不得用于臨床診斷或治療,不得用于食品或藥品,不得存放于普通住宅內(nèi)。
為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。
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答:可能的原因有:
1、目的蛋白有多個修飾位點,本身可以呈現(xiàn)多條帶,建議查閱文獻或進行生物信息學分析,獲得蛋白序列的修飾位點信息,通過去修飾確定蛋白實際大小;
2、樣本處理過程中目的蛋白發(fā)生降解,建議加入蛋白酶抑制劑;樣本處理時在冰上操作;
3、雜蛋白多,建議處理目的蛋白;
4、抗體特異性不強,建議使用特異性強的抗體;
5、抗體孵育時間過久,建議減少抗體孵育時間;
6、二抗與抗原有交叉反應,建議選擇合適的封閉物;
7、二聚體或多聚體存在,建議增加蛋白質(zhì)變性過程及強度;
8、底物顯色與曝光時間過長,建議縮短顯色及曝光的時間。
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