中性樹膠(Neuteal Balsam)適用于顯微技術上生物組織切片的封藏,是顯微鏡切片長久標本或動植物制片的封藏劑,光學玻璃鏡頭與眼鏡片等的膠合劑。其透明度高,折光率近似玻璃,可使切片封藏后觀察得更清晰,長期保存不易褪色。廣泛使用在生物學,醫(yī)學作為生物切片封藏劑,以及光學玻璃儀器的粘固劑,與玻璃的黏著力很強,兩片玻璃膠合完全干固后難以分離。其封藏效果與加拿大樹膠性質(zhì)相似,用途相同。是一種天然樹脂,經(jīng)提煉與中和后溶解在二甲苯中成60%溶液,干燥后凝結(jié)成透明無色的固體,沒有收縮變黃、紋裂等弊病,沒有像加拿大樹膠有年久變黃切片氧化退色等缺點。切片標本有蘇木色精、曙紅、番紅、固綠、洋紅染色的,保藏數(shù)年顏色無變化。許多整裝標本如吸血蟲、滌蟲等寄生蟲,用其封固,均能取得優(yōu)良效果。
性狀:本品為黃色透明油狀液體,呈中性反應。溶于二甲苯,不溶于水。使用時如嫌太厚,可加入少許二甲苯;如嫌太薄,可在40℃的恒溫箱中打開瓶口使二甲苯蒸發(fā),但應避免過度。折光率nD20為1.5200-1.5240,酸值小于20。
1.封片后幾近無色,拈度適中,干后堅硬牢靠,優(yōu)于常用的加拿大樹膠。
2.封片后幾近無色。切片封藏后存放日久無氧化、褪色現(xiàn)象,色彩仍鮮艷。
封片方法很簡單,在載玻片中央滴2-3滴樹膠液(注意要滴在一起否則容易有氣泡),然后把蓋玻片慢慢放上去,輕輕擠壓,樹膠液會向外側(cè)擴散至整個鏡片,通風晾幾個小時后用棉球粘上透明劑或者松節(jié)油把鏡片邊緣多余的樹膠擦洗干凈。然后再放在通風處晾干,封片可常溫保存。
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答:可能的原因有:
1、目的蛋白有多個修飾位點,本身可以呈現(xiàn)多條帶,建議查閱文獻或進行生物信息學分析,獲得蛋白序列的修飾位點信息,通過去修飾確定蛋白實際大小;
2、樣本處理過程中目的蛋白發(fā)生降解,建議加入蛋白酶抑制劑;樣本處理時在冰上操作;
3、雜蛋白多,建議處理目的蛋白;
4、抗體特異性不強,建議使用特異性強的抗體;
5、抗體孵育時間過久,建議減少抗體孵育時間;
6、二抗與抗原有交叉反應,建議選擇合適的封閉物;
7、二聚體或多聚體存在,建議增加蛋白質(zhì)變性過程及強度;
8、底物顯色與曝光時間過長,建議縮短顯色及曝光的時間。
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