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本產(chǎn)品適用于從大腸桿菌等細(xì)菌中提取高純度的質(zhì)粒DNA，利用經(jīng)典的堿裂解法，使用了高載量的硅基提取柱，具有操作簡(jiǎn)單，耗時(shí)短以及質(zhì)粒得率高等優(yōu)點(diǎn)。
本試劑盒提取的質(zhì)粒可用于下游的酶切、PCR擴(kuò)增、DNA測(cè)序、轉(zhuǎn)化、體外轉(zhuǎn)錄翻譯等，但不能直接用于細(xì)胞轉(zhuǎn)染。如需轉(zhuǎn)染級(jí)質(zhì)粒DNA，請(qǐng)使用本公司的無(wú)內(nèi)毒素質(zhì)粒提取試劑盒(PM0105)。

準(zhǔn)備工作：次使用時(shí)，在Buffer P1中加入1/100體積的RNase A，之后于2-8℃保存。在Buffer PE中加入相應(yīng)體積的乙醇。
1. 取4-6ml菌液，12000 rpm離心5min收集菌體。
2. 加入250μl Buffer P1，吹打重懸菌體。
3. 加入250μl Buffer P2，蓋上離心管蓋，上下顛倒4-6次。(此時(shí)細(xì)菌懸液會(huì)變澄清)
4. 加入350μl Buffer N3，上下劇烈顛倒4-6次。(此步會(huì)出現(xiàn)白色絮狀沉淀)
5. 12000 rpm 離心10min。(如上清液中仍有細(xì)菌碎片，可再次離心)
6. 將提取柱置于收集管中，小心吸取上清液(盡量不要吸到沉淀物)加入到提取柱中，離心1min，然后棄去收集管中的液體。
7. 可選步驟：將提取柱重新放在收集管中，在提取柱加入500μl Buffer PB，離心1min，棄去收集管中的液體。(E.coli JM109、BL21HB101、ET12567等endA+宿主菌推薦此步驟，有利于降低質(zhì)粒中蛋白質(zhì)殘留。E.coli 5α、TOP10等endA-宿主菌此步可省略。)
8. 加入750μl Buffer PE，離心30s，棄去接收管中的液體。
9. 將提取柱重新放在收集管中，再次離心1min。
10. 將提取柱置于干凈的1.5ml離心管中，在提取柱中加入40-60μl Buffer EB或水(盡量滴加在膜中央)，靜置1min，之后 12000rpm 離心1min。(Buffer EB 或水可事先在60℃水浴預(yù)熱，以增加洗脫效率。)

1、產(chǎn)品(除添加RNase A后的Buffer P1)可在15-25℃條件下保存15個(gè)月以上。添加RNase A后的Buffer P1在2-8℃條件下可穩(wěn)定保存6個(gè)月以上。
2、次使用時(shí)請(qǐng)按照試劑瓶上說(shuō)明在Buffer PE中加入乙醇。
3、Buffer P2和Buffer N3含有SDS等成分，在低溫下出現(xiàn)結(jié)晶屬正常現(xiàn)象，如出現(xiàn)混濁或結(jié)晶，在37℃孵育5-10min即可恢復(fù)澄清，不影響使用。實(shí)驗(yàn)過(guò)程中請(qǐng)戴手套，請(qǐng)勿用手直接接觸Buffer P2和Buffer N3。
4、高拷貝質(zhì)粒(如pUC、pET系列)的得率高可達(dá)30ug以上。中低拷貝質(zhì)粒得率在3-20ug之間。
5、對(duì)于低拷貝(如pACYC、pSC101衍生質(zhì)粒)或大質(zhì)粒(>10kb)提取，應(yīng)加大起始菌量，使用5-10ml過(guò)夜培養(yǎng)物，同時(shí)按照比例增加 Buffer P1、P2、N3的使用量。
6、Buffer EB可在使用前在60℃水浴預(yù)熱，以增加洗脫效率。
7、為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
8、本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。