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rizol總RNA提取試劑盒是本公司自主研發和生產的用于細胞或組織的總 RNA提取試劑。Trizol含酚和異硫氰酸胍等物質，具有極強的裂解能力，可在短時間內裂解細胞和組織樣本，并有效抑制RNase活性，從而有效防止RNA在提取過程中的降解，保證RNA的完整性。同時本產品使用氯仿替代物替代氯仿，毒性小，操作更安全。加入氯仿替代物離心后，溶液形成上清層為水相(無色) 、中間層、下層為有機相 ，上清層用異丙醇沉淀回收總 RNA ，中間層用乙醇沉淀回收 DNA ，下層用異丙醇沉淀回收蛋白。

本產品適用于次生代謝較少的植物組織(如幼苗、幼葉等)、培養細胞、動物組織、微生物。提取過程可在1h內完成，提取的總 RNA純度高、完整性好，大限度的去除了蛋白質和基因組DNA等雜質，可以直接用于RT-PCR、Northern Blot、體外翻譯及mRNA純化等實驗。

本產品安全性高：使用氯仿替代物替代氯仿，毒性較?。贿m用范圍廣；操作簡單省時，整個過程可在1h內完成；提取的RNA純度高、污染少。

1. 自備試劑RNase 、無水乙醇、異丙醇、DEPC處理水等。

2.   細胞裂解或組織勻漿。

(1) 貼壁細胞：吸盡培養液，每10cm2細胞加入1ml Trizol。一般6 孔板每孔加1ml，12孔板每孔加 0.5ml，晃動 3-5下，再用槍吹打2-3下，確保全部裂解，然后吸至離心管中。

(2) 懸浮細胞：離心收集細胞，吸盡液體，每5x106~ 107動植物或酵母細胞或每107細菌細胞加入1ml Trizol。用槍吹打或適當渦旋振蕩，確保全部裂解。某些酵母和細菌如裂解不充分，可用勻漿器勻漿，確保全部裂解。

(3) 植物組織：植物葉片直接放入研缽中，加入少量液氮，迅速研磨成粉末，每50-100mg植物葉片加入1ml Trizol。

注：經典模式植物如擬南芥、煙草、小麥、玉米等植物葉片能很好地提取RNA；但一些多糖多酚植物，如西紅柿、棉花、毛白楊等，不能使用Trizol提取 RNA。

(4) 動物組織：按10-30mg組織加入1ml Trizol，用電動勻漿器或者一次性研磨杵充分勻漿。

2. 對于某些蛋白，多糖或脂含量很高的細胞或組織，Trizol裂解后可能會有不溶物或油脂狀漂浮物。需12,000g，4℃離心10分鐘，然后吸取澄清的裂解產物至一新的離心管中。

3. 室溫放置 5 分鐘，使樣品充分裂解。

4. 每毫升Trizol加0.1ml氯仿替代物，渦旋震蕩混勻或猛烈晃動15 秒，室溫放置 2-3 分鐘。

5. 12000g，4℃離心15分鐘，吸取含總RNA的上層無色水相至一新的離心管中，每毫升Trizol約可吸取0.5-0.55ml。

6. 加入與上清等體積的預冷異丙醇，顛倒數次混勻，室溫沉淀 10 分鐘。如果希望提取microRNA等小 RNA，推薦-70℃沉淀過夜。

7. 12,000g，4℃離心10分鐘，在管底可見RNA沉淀，棄上清。

8. 每毫升初的Trizol加入1ml 75%乙醇(DEPC水配制)，渦旋震蕩或顛倒混勻。

9. 7,500g 4℃離心5分鐘，棄上清。再用離心機甩一下(>5,000rpm, 離心1 秒)，小心吸盡液體。

10. 待RNA晾干后，加入20-50ul DEPC水溶解，-70℃凍存。注意：切勿讓RNA過分干燥，否則將極難溶解，且測出的A260/280值會低于1.6。

11. 分析與定量(選做)

①測定樣品在260nm和280nm的吸收值確定 RNA 的質量，按1OD=40pgRNA 計算RNA的產率OD260/280在1.8~2.0 視為抽提RNA純度較好，濃度在4ug/ml以上的樣品適于用分光光度計測定。

②進行甲醛變性瓊脂糖電泳，確定RNA的完整性和污染情況。

③核酸分析儀測定RNA的質量和純度。

1 、樣品保存:加入Trizol混勻后，樣品可在-70℃放置1~2 月;RNA 樣品可以在70%酒精中-70℃保存 2~4 周:如果需要長期保存，應置于超低溫冰箱中保存。使用凍存的細胞或組織抽提總 RNA 的效果通常比新鮮的細胞或組織差一些。因為在細胞或組織凍融過程中一些細胞或組織內的RNase會被釋放出來并剪切樣品。如果不能及時抽提RNA，推薦先加入適量Trizol，并裂解樣品后凍存。

2 、Trizol 是強腐蝕性物質，為防止濺入眼睛，請戴防護眼鏡或使用透明保護屏。若不慎污染皮膚或眼睛后，立即用清水或生理鹽水沖洗，必要時尋求醫生的幫助。

3 、所有離心管，槍頭及相關溶液都必須無 RNA酶污染。耐高溫器物可150℃烘烤4小時以去除 RNA 酶，其它器物去除RNA酶可考慮用0.01%的 DEPC 水浸泡過夜，然后滅菌，烘干。溶液需用 DEPC水配制。

4 、該試劑僅用于科研領域，不適用于臨床診斷或其他用途。

5 、為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作，且盡量不要對著 RNA 樣品說話，以防 RNA 酶污染。