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Safe Green（可替代Sybr Green）是一種新型核酸染料。 Safe Green主要成分是花菁染料，實驗顯示在凝膠染色濃度下沒有發現誘變性，具有使用相對安全、檢測靈敏等特點，可以作為各種核酸電泳的染色劑，適用于各種片段大小染色。與標準凝膠成像系統和可見光激發的凝膠觀察裝置完美兼容，適用于紫外凝膠成像系統或藍色可見光激發的凝膠觀察裝置。

1. 相對安全：盡管可以穿透細胞膜進入細胞內，屬于花菁染料，使用相對安全，實驗顯示在工作濃度(凝膠染色濃度)下無致突變性，可以代替致癌物溴化乙錠EB作為各種核酸電泳的染色劑。

2. 靈敏度高：適用于各種大小片段的電泳染色，對核酸遷移的沒有任何影響。

3.穩定性高：適用于使用微波或其它加熱方法制備瓊脂糖凝膠；室溫下在酸或堿緩沖液中極其穩定，耐光性強。

4.信噪比高：樣品熒光信號強，背景信號低。

5.操作簡單：在預制膠和電泳過程中不降解,可直接用可見光凝膠透射儀觀察。

6.適用范圍廣：可選擇電泳前染色（膠染法）或電泳后染色（泡染法）；適用瓊脂糖凝膠或聚丙烯酰胺凝膠電泳；可用于dsDNA、ssDNA 或RNA 染色。

7.儀器兼容：適用于使用254nm 激發的紫外凝膠成像系統或藍色可見光激發的凝膠觀察裝置。和SYBR Green 的光譜相似。

一、瓊脂糖凝膠電泳染色（推薦方法）

將Safe Green Nucleic Acid Dye加入凝膠中

1．制膠：按常規操作，制備瓊脂糖凝膠，加入濃縮的10,000x Safe Green Nucleic Acid Dye，使其在凝膠中的終濃度為1x（例如：制備50ml的凝膠，加入染料5μl），輕輕搖勻，倒膠。

2．按常規方法電泳，觀測結果（染料不會影響使DNA遷移！）。

二、泡染法

1．按照常規方法進行電泳。

2．用H2O將10,000x Safe Green Nucleic Acid Dye儲液稀釋約3,300倍到純水中，制成3x染色液。

3．將凝膠小心地放入合適的容器中，如聚丙烯容器中。緩慢加入足量的3x染色液浸沒膠。室溫振蕩染色30min左右。

4.  在凝膠成像儀內，觀測結果。

1. 由于Safe Green 具有良好的熱穩定性，可以在熱的瓊脂糖溶液中直接添加，而不需要等待溶液冷卻。搖晃，振蕩或者翻轉以保證染料充分混勻。也可以選擇將Safe Green 儲液加到瓊脂糖粉末和電泳緩沖液中，然后用微波爐或其他常用方式加熱以制備瓊脂糖凝膠。Safe Green 兼容所有常用的電泳緩沖溶液。

2. 如果條帶總是彌散或分離不理想，請使用泡染法染色以確認問題是否與染料有關。如果染色后問題依舊存在，則說明問題與染料無關，請嘗試：降低瓊脂糖濃度；選用更長的凝膠；延長凝膠時間以保證邊緣清晰；改進上樣技巧或選擇泡染法染色。

3. Safe Green對玻璃器皿和非聚丙烯材料具有一定的親合力。建議在稀釋、貯存、染色等使用過程中用聚丙烯類容器。對于聚丙烯酰胺凝膠請使用泡染法。