本產(chǎn)品包含特殊修飾的Taq DNA Polymerase 、dNTP以及優(yōu)化的緩沖體系，只需加入引物和模板即可進(jìn)行擴(kuò)增， 減少了移液操作，提高了檢測通量和結(jié)果重復(fù)性。特殊修飾的Taq DNAPolymerase大大提高了擴(kuò)增反應(yīng)的特異性， 擴(kuò)增體系中加入的保護(hù)劑使得2× Green Taq SuperMix反復(fù)凍融后仍可保持穩(wěn)定活性。本產(chǎn)品含有綠色染料，可在反 應(yīng)結(jié)束后直接進(jìn)行電泳，方便快捷。
1、反應(yīng)體系
2、 以 50 μL 體系為例，推薦使用的模板量如下表：
3、cDNA 模板加入體積不宜超過 PCR 反應(yīng)總體積的 1/10.
4、反應(yīng)程序
5、如果模板具有復(fù)雜二級結(jié)構(gòu)或高GC區(qū)域，可將預(yù)變性時間延長至5~ 10 min以提高預(yù)變性效果；
6、循環(huán)反應(yīng)中的退火溫度需要根據(jù)引物的Tm值進(jìn)行調(diào)整，一般設(shè)置成低于引物Tm值3~5℃即可；對于復(fù)雜模板，需要調(diào)節(jié)退火溫度和延長延伸時間來實現(xiàn)高效擴(kuò)增。
7、.延伸時間請根據(jù)目的片段長度參考以下方法進(jìn)行設(shè)定： 目的片段長度＜1kb，建議延伸時間為10sec/kb；1kb-5kb建議延伸時間為15sec/kb；5kb -10kb建議延伸時間為30sec/kb。
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答：可能的原因有：
1、IHC實驗一抗和二抗不兼容；
2、沒有足夠的一抗與目的蛋白結(jié)合；
3、抗體可能不適用于IHC，因為其可能無法識別蛋白的天然(3D)形式；
4、一抗/二抗/信號放大試劑盒可能因儲存不當(dāng)、稀釋不當(dāng)或多次反復(fù)凍融而失去活性；
5、該蛋白不存在于目標(biāo)組織中；
6、目的蛋白在組織中含量并不豐富；
7、二抗未避光保存（進(jìn)行熒光檢測時）；
8、脫蠟可能不充分；
9、固定步驟可能會改變抗體識別的抗原表位；
10、抗體不能穿透蛋白所定位的細(xì)胞核（核蛋白）；
11、PBS緩沖液被細(xì)菌污染，細(xì)菌會破壞目的蛋白上的磷酸基團(tuán)（磷酸化蛋白）；
12、抗原修復(fù)不全，對于甲醛固定的組織必須用充分抗原修復(fù)來打開抗原表位，以利于與抗體結(jié)合。
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