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BT-474 [BT474]細胞是由E·Lasfargues和W·G·Coutinho從一個實心的乳腺浸潤性導管癌中分離到的細胞株。

1） 來源: 乳腺導管癌

2） 形態(tài): 上皮細胞樣 短梭形 多角形 單層貼壁生長 細胞分泌物黑點

3）含量:  >1x10^6 細胞數

4） 規(guī)格:  T25 瓶或者 1mL 凍存管包裝

5）用途:  僅供科研使用

（1）1mL 凍存管包裝干冰運輸，收 到后-80 度冰箱保存過夜后轉入液氮或直接復蘇，若發(fā)現干冰已揮發(fā)干凈、凍存 管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染，請立即與我們聯(lián)系。
（2）T25 瓶復蘇的存活 細胞常溫發(fā)貨，收到后按照細胞接收后的處理方法操作。

1）收到細胞后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h，若發(fā)現培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細胞有污染，請拍照后及時聯(lián)系我們。 

2）請在4或5X顯微鏡下確認細胞狀態(tài)，同時給剛收到的細胞拍照（10×，20×）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存，作為售后時收到時細胞狀態(tài)的依據。

3）貼壁細胞：T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱中約2-3h，顯微鏡下觀察細胞的情況，若細胞密度在70%-80%左右，可進行傳代，首次傳代建議1:2(也可根據情況調整)，若細胞生長不足70%，建議消化處理后，轉移到新的T25培養(yǎng)瓶（1：1）繼續(xù)培養(yǎng)。

4）半貼細胞或貼壁不牢（懸浮）細胞：T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱中約2-3h，顯微鏡下觀察細胞的情況，若細胞密度在60%以下，客戶需收集T25瓶中的懸浮細胞離心后用完全培養(yǎng)基重懸后打回到原培養(yǎng)瓶中繼續(xù)培養(yǎng)，若細胞生長70%-90%對細胞進行傳代，傳代時需要收集培養(yǎng)基中懸浮的細胞離心后回收。

5）備注：運輸用的培養(yǎng)基（灌注培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細胞，請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。收到細胞后次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1：2傳代 。

1）準備培養(yǎng)基：1640培養(yǎng)基；10μg/ml Insulin；2mM L-glutamine；優(yōu)質胎牛血清，20%；p/s雙抗，1%

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5% 。 溫度：37 攝氏度，培養(yǎng)箱 濕度為 70%-80%。

3）凍存液：50%基礎培養(yǎng)基，40%FBS，10%DMSO，現用現配。