CT26 細胞是被 N-亞硝基-N-甲基脲烷(NNMU)誘導(dǎo)得到的未分化的小鼠結(jié)腸癌細胞,該細胞的一個克隆形成的細胞系被命名為 CT26.WT。CT26.WT 被逆轉(zhuǎn)錄病毒載體 LXSN 穩(wěn)定轉(zhuǎn)化形成了一個致死性的亞克隆 CT26.CL25,這一病毒載體含有 lacZ 基因、編碼腫瘤相關(guān)抗原(TAA)和 beta 半乳糖苷酶。CT26.WT 和 CT26.CL25 細胞在小鼠中生長速度和致死率都很相似,不同的是 CT26.CL25 細胞可以表達腫 瘤相關(guān)抗原和 beta 半乳糖苷酶,因此這兩株細胞可以聯(lián)合用于免疫治療和宿主免疫反應(yīng)的研究。
1) 來源: 小鼠結(jié)腸
2) 形態(tài): 成纖維細胞樣,貼壁生長
3)含量: >1x10^6 細胞數(shù)
4) 規(guī)格: T25 瓶或者 1mL 凍存管包裝
5)用途: 僅供科研使用
(1)1mL 凍存管包裝干冰運輸,收 到后-80 度冰箱保存過夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復(fù)蘇,若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存 管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染,請立即與我們聯(lián)系。
(2)T25 瓶復(fù)蘇的存活 細胞常溫發(fā)貨,收到后按照細胞接收后的處理方法操作。
1)收到細胞后,75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h,若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細胞有污染,請拍照后及時聯(lián)系我們。
2)請在4或5X顯微鏡下確認細胞狀態(tài),同時給剛收到的細胞拍照(10×,20×)各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存,作為售后時收到時細胞狀態(tài)的依據(jù)。
3)貼壁細胞:T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱中約2-3h,顯微鏡下觀察細胞的情況,若細胞密度在70%-80%左右,可進行傳代,首次傳代建議1:2(也可根據(jù)情況調(diào)整),若細胞生長不足70%,建議消化處理后,轉(zhuǎn)移到新的T25培養(yǎng)瓶(1:1)繼續(xù)培養(yǎng)。
4)半貼細胞或貼壁不牢(懸?。┘毎篢25瓶置于37℃培養(yǎng)箱中約2-3h,顯微鏡下觀察細胞的情況,若細胞密度在60%以下,客戶需收集T25瓶中的懸浮細胞離心后用完全培養(yǎng)基重懸后打回到原培養(yǎng)瓶中繼續(xù)培養(yǎng),若細胞生長70%-90%對細胞進行傳代,傳代時需要收集培養(yǎng)基中懸浮的細胞離心后回收。
5)備注:運輸用的培養(yǎng)基(灌注培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細胞,請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。收到細胞后次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1:2傳代 。
1)準備培養(yǎng)基:RPMI1640培養(yǎng)基;10%胎牛血清;1%雙抗。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5% 。 溫度:37 攝氏度,培養(yǎng)箱 濕度為 70%-80%。
3)凍存液:55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO。
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答:可能的原因包括培養(yǎng)基質(zhì)量、血清質(zhì)量、溫度、pH值、氣體比例等。
解決方法有:
1. 使用高質(zhì)量的培養(yǎng)基和血清,確保其無菌、無支原體污染,并保證在保質(zhì)期內(nèi)使用;
2. 培養(yǎng)箱溫度和氣體比例要保持穩(wěn)定,定期校準;
3. 每天檢查并記錄細胞培養(yǎng)的環(huán)境參數(shù),如溫度、pH值、氣體比例等,以便及時發(fā)現(xiàn)問題;
4. 定期更換培養(yǎng)基,保持細胞營養(yǎng)充足;
5. 對于生長緩慢的細胞株,可以嘗試進行克隆篩選或更換培養(yǎng)基。
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