Dulbecco's 改良培養基--DMEM(Dulbecco's Modified Eagle Medium)是在MEM培養基的基礎上研制的,與MEM培養基相比,氨基酸的含量增加了2倍,維生素的含量增加了4倍,同時還增加了非必須氨基酸、微量鐵離子以及丙酮酸鈉。DMEM培養基初設計葡萄糖含量為1000 mg/L(低糖型),后來又發展出葡萄糖含量為4500 mg/L(高糖型),現已廣泛應用于各種細胞的培養。
DMEM高糖型培養基普遍應用于生長快、粘附性低的細胞、雜交瘤的骨髓瘤細胞、克隆細胞、DNA轉染的轉化細胞、各種原代病毒宿主細胞、單一細胞的培養以及疫苗的生產,例如利用CHO細胞表達EPO和生產乙肝疫苗。
本產品含有多類細胞培養所需的氨基酸、維生素、無機鹽等多種成分,但不含蛋白質、脂類或任何生長因子,故此產品需搭配血清或無血清添加物使用。
1、本產品經0.1 μm過濾除菌,使用時應注意無菌操作,避免污染;
2、為保持本產品的佳使用效果,請勿進行凍融處理;
3、本產品僅用于科研或進一步研究使用,不用于診斷和治療。
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一旦在細胞培養的過程中發現有黑點生成,首先,要肉眼觀察培養基是否混濁,然后,在鏡下觀察培養細胞生長的狀態,黑點是否游動。如果細胞被污染,微生物則會大量繁殖,培養基就會迅速變黃、變混濁。污染包括細菌污染、支原體污染等。如果在鏡下觀察細胞,生長狀態良好,與黑點出現前相比,沒有任何變化,那么,黑點的出現可能與以下幾種情況有關:
(1)細胞生長過老,破碎的細胞殘骸;
(2)配制培養基的pH值偏高,不宜細胞生長;
(3)培養原代細胞中出現小黑點,可能是原代組織中的雜質,多次傳代可以消除;
(4)血清等級不足以維持細胞良好的生長,更換高等級的胎牛血清。
答:可能的原因包括培養基質量、血清質量、溫度、pH值、氣體比例等。
解決方法有:
1. 使用高質量的培養基和血清,確保其無菌、無支原體污染,并保證在保質期內使用;
2. 培養箱溫度和氣體比例要保持穩定,定期校準;
3. 每天檢查并記錄細胞培養的環境參數,如溫度、pH值、氣體比例等,以便及時發現問題;
4. 定期更換培養基,保持細胞營養充足;
5. 對于生長緩慢的細胞株,可以嘗試進行克隆篩選或更換培養基。
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