本胰酶細胞消化液含0.25%胰酶和酚紅,不含 EDTA、Ca2+和Mg2+。該消化液已用0.22um濾膜過濾除菌, 可以直接用于培養細胞的消化,或者一些組織的消化。本胰酶細胞消化液具有方便快速的特點,通常室溫消化1分鐘左右就可以消化下大多數貼壁細胞。
1.貼壁細胞的消化:
a)吸去培養液,用無菌的PBS、Hanks液或無血清培養液洗滌細胞一次,以去除殘余的血清。
b)加入少量胰酶細胞消化液,略蓋過細胞即可,室溫放置30秒至2分鐘。不同的細胞消化時間有所不同。
c)顯微鏡下觀察,細胞明顯收縮,并且肉眼觀察培養器皿底部發現細胞的形態發生明顯的變化;或者用槍吹打細胞發現細胞剛好可以被吹打下來。此時吸除胰酶細胞消化液。加入含血清的完全細胞培養液,吹打下細胞,即可直接用于后續實驗。
d)如果發現消化不足,則加入胰酶細胞消化液重新消化。
e)如果發現細胞消化時間過長,未及時吹打細胞,細胞已經有部分直接從培養器皿底部脫落,直接用胰酶細胞培養液把細胞全部吹打下來。1000-2000g 離心1分鐘,沉淀細胞,盡量去除胰酶細胞消化液后,加入含血清的完全培養液重新懸浮細胞,即可用于后續實驗。
2. 組織的消化: 不同的組織需要消化的時間相差很大,通常以消化后可以充分打散組織為宜。
1、在使用胰酶細胞消化液的過程中要特別注意避免消化液被細菌污染。
2、胰酶細胞消化液消化細胞時間不宜過長,否則細胞鋪板后生長狀況會較差。
3、為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴-次性手套操作。
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答:可能的原因包括培養基質量、血清質量、溫度、pH值、氣體比例等。
解決方法有:
1. 使用高質量的培養基和血清,確保其無菌、無支原體污染,并保證在保質期內使用;
2. 培養箱溫度和氣體比例要保持穩定,定期校準;
3. 每天檢查并記錄細胞培養的環境參數,如溫度、pH值、氣體比例等,以便及時發現問題;
4. 定期更換培養基,保持細胞營養充足;
5. 對于生長緩慢的細胞株,可以嘗試進行克隆篩選或更換培養基。
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