CCK-8試劑盒是基于高度水溶性的四唑鹽 WST-8(2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H- 四唑單鈉鹽)而廣泛應用于細胞增殖和細胞毒性的快速、高靈敏度檢測的試劑盒。WST-8是一種類似于MTT的化合物，在電子介體的作用下可以被線粒體內的一些脫氫酶還原生成水溶性橙黃色甲瓚產物（formazan），產生顏色反應。細胞增殖越多越快，則顏色越深；細胞毒性越大，則顏色越淺。對于同樣的細胞，顏色的深淺和細胞數目成正比。增強型CCK-8試劑盒檢測靈敏度高于其他四唑鹽（例如 MTT，XTT，MTS 或 WST-1）
WST-8是MTT的一種升級替代產品，和MTT或其它MTT類似產品如XTT、MTS等相比有明顯的優點。首先，MTT被線粒體內的一些脫氫酶還原生成的formazan不是水溶性的，需要有特定的溶解液來溶解；而WST-8和XTT、MTS產生的formazan 都是水溶性的，可以省去后續的溶解步驟。其次，WST-8產生的formazan比XTT和MTS產生的formazan更易溶解。再次， WST-8比XTT和MTS更加穩定，使實驗結果更加穩定。另外，WST-8和MTT、XTT等相比線性范圍更寬，靈敏度更高。WST-8和WST-1相比，檢測靈敏度更高，更易溶解，并且更加穩定
酶標儀（能測450nm處的吸光度）及二氧化碳培養箱（37℃，5% CO2）
96孔細胞培養板，透明平底、可調節式移液槍及槍頭
1. 由于 CCK-8 分析基于活細胞中脫氫酶活性的檢測，因此影響活細胞中脫氫酶活性的條件或化學物質可能會導致實際活細胞數與使用 CCK-8 分析確定的細胞數之間存在差異；
2. 混合或重懸組分時，避免產生氣泡，因為它們會影響 OD 值讀取；
3. 孵育時間因孔中細胞的類型和數量而異。通常，白細胞著色較弱，因此可能需要較長的孵育時間（多4 h）或大量細胞（~105個細胞/孔）；
4. 如果由于長期培養而改變了培養基的顏色或 pH，請在添加 CCK-8 時更換培養基；
5. 由于 CCK-8 的毒性低，因此相同的細胞可用于其他細胞分析。
6. 一般情況下OD值范圍在0.1-2.0都可以，在1.0附近比較好。一般可將對照孔吸光度（含細胞、培養基、CCK-8溶液，不含藥物）的OD值控制在0.8-1.0左右，確定細胞的檢測數量和孵育時間。
1.Chen H ,Liu P ,Yu R , et al.Swertiamarin ameliorates type 2 diabetes by activating ADRB3/UCP1 thermogenic signals in adipose tissue[J].Phytomedicine,2024,135156190-156190.(IF 6.7)
答：可能是由于培養條件不適、基因突變、藥物作用等原因引起的。
解決方法：
1、優化培養條件，如調整溫度、pH值、氣體比例等；
2、觀察細胞形態和生長情況，及時發現凋亡跡象；
3、對于凋亡嚴重的細胞株，可以嘗試進行基因檢測和藥物篩選，以找到引起凋亡的原因。
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