因光照、pH值及溫度等環境影響或者熒光分子和其它分子相互作用等因素,造成熒光分子的不可逆破壞。使用熒光顯微鏡和激光共 聚焦顯微鏡觀察時,可見信號減弱。抗熒光淬滅封片劑用于對熒光組織和細胞樣品的封片,添加獨有的抗熒光淬滅劑成分,兼容多種熒光染料,可保護整個可見光譜和紅外光譜,防止熒光信號淬滅;樣品封片后4℃或-20℃避光保存2周以上,仍可維持原有發光強度。
抗熒光淬滅封片劑溶液: 即用型;無需預混組分。
I 貼壁細胞樣品:
1. 染色完畢后,吸盡液體。
2. 滴一滴增強型抗熒光淬滅劑于載玻片上,蓋上貼有細胞的蓋玻片,讓細胞接觸封片液,盡量避免氣泡。
3. 隨后即可在熒光顯微鏡下觀察細胞樣品。
Ⅱ 組織切片:
1. 染色完畢后,吸盡液體。
2. 滴一滴增強型抗熒光淬滅劑于組織切片上,蓋上蓋玻片,讓切片接觸封片液,盡量避免氣泡。
3. 隨后即可在熒光顯微鏡下觀察組織切片。
Ⅲ 其它樣品:
其它樣品參考細胞樣品或組織切片進行操作。
1. 熒光物質均易發生淬滅,染色后的樣品宜避光保存。
2. 在使用增強型抗熒光淬滅劑的情況下可以減緩淬滅,但仍宜盡量避光和盡早拍照。
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1、一抗/二抗濃度可能過高;
2、內源性過氧化物酶具有活性;
3、使用與染色組織相同種屬來源的一抗(例如在小鼠組織上使用小鼠一抗)。應用二抗時,由于二抗是靶向組織種屬的,與組織中的免疫球蛋白或蛋白的Fc片段結合;
4、切片/細胞已干燥;
5、一抗用多克隆抗體易出現非特異性著色;
6、非特異性組分與抗體結合。
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