不建議將EDTA抗原修復(fù)液回收利用。回收利用的抗原修復(fù)液易污染，很可能滋生細(xì)菌。EDTA通過螯合金屬離子發(fā)揮作用，使用后其有效濃度會因結(jié)合樣本中的金屬離子而下降，可能無法保證后續(xù)抗原修復(fù)效果。反復(fù)加熱（如高壓或微波處理）可能改變?nèi)芤簆H，影響修復(fù)效率。使用過的液體可能攜帶組織碎片、蛋白質(zhì)等污染物，導(dǎo)致后續(xù)樣本背景升高或假陽性結(jié)果。

生化試劑盒初一般是采用分光光度法，用分光光度計測量吸光度。微量法是隨著酶標(biāo)儀和微孔板的普及，改用酶標(biāo)儀和酶標(biāo)板測量吸光度。除了儀器不同以外，主要差別是反應(yīng)體系更小，一般不超過250ul，計算公式的系數(shù)會有一定變化。

d：由比色皿光徑，1cm改為96孔板直徑，0.5 cm（也有0.6cm的）

但對于標(biāo)明只用分光光度法的試劑盒，不建議使用酶標(biāo)儀進(jìn)行酶活性測定。非要用酶標(biāo)儀進(jìn)行檢測，一定要按照說明書將反應(yīng)體系縮小至250微升左右，加樣表中各試劑體積一定要按照比例縮小。不過，因?yàn)槌跹邪l(fā)時是按照分光光度法進(jìn)行設(shè)計和調(diào)整的，用戶改變測定儀器后，我們不保證能夠取得好的結(jié)果。

普通酶標(biāo)板是用來測定反應(yīng)產(chǎn)物的光吸收峰波長在可見光范圍的生化試劑盒項(xiàng)目的，無法測量反應(yīng)產(chǎn)物的光吸收峰波長在紫外區(qū)域的項(xiàng)目。可見光是電磁波譜中人眼可以感知的部分，可見光譜沒有精確的范圍;一般人的眼睛可以感知的電磁波的波長在400~760nm之間，但還有一些人能夠感知到波長大約在380~780nm之間的電磁波。可見光通常指波長范圍為:390nm-780nm的電磁波。注意：我們看到的其實(shí)是反射的光，比如ELISA終止后的黃色，黃光波長為580-595nm，但實(shí)際測量的450nm是它的補(bǔ)色。

    UV板是紫外板，這些微板有一個獨(dú)特的紫外線透明底部，是測定反應(yīng)產(chǎn)物的光吸收峰波長在紫外區(qū)域的理想耗材。紫外光被劃分為A 射線、B 射線和C 射線(簡稱UVA、UVB 和UVC)，波長范圍分別為400-315nm，315-280nm，280-190nm

1）對照的設(shè)置對于測定結(jié)果的可靠性影響很大，尤其是待測液中含有與測定原理中擬直接檢測的產(chǎn)物一樣的物質(zhì)時。通過設(shè)置對照，不僅可以排除本底的影響，而且可以排除其它一些未知的復(fù)雜影響，保證測定結(jié)果可靠。

（2）首先考慮的是保證測定結(jié)果可靠。因此，有些試劑盒只設(shè)空白對照，但是有些試劑盒每個樣品都設(shè)對照。其中后者是根據(jù)反應(yīng)原理，為了排除可能的復(fù)雜影響。

關(guān)于設(shè)置樣本對照是否造成浪費(fèi)。首先必須要保證測定結(jié)果可靠，因?yàn)槿绻麥y定結(jié)果不可靠，就不可能得到正確結(jié)論，那么所有的研究投入，包括前期的樣品培養(yǎng)與處理、購買試劑盒的費(fèi)用和用戶的時間與精力，都會浪費(fèi)。為此，我們精心權(quán)衡，在必要時每個樣品都設(shè)對照。

動物組織及細(xì)胞微生物等，可以用質(zhì)量或者細(xì)胞數(shù)量計算，也可以建議測蛋白濃度；植物可建議用質(zhì)量計算；血液或是其他液態(tài)樣品，可建議用體積計算。如客戶購買蛋白含量測定試劑盒，除了說明書強(qiáng)調(diào)用考馬斯亮藍(lán)法的，通常建議BCA法。動植物組織因?yàn)榈鞍缀扛撸?/span>10mg/ml左右，如果用考馬斯亮藍(lán)法測定蛋白濃度的話通常需要用PBS緩沖液等稀釋液進(jìn)行稀釋。

GSH和GSSG的測定需新鮮樣品，長時間放置的樣品GSH會被氧化成GSSG，客戶購買試劑盒時，可提供一下建議。GR和TrxR是GSH的再生酶，在不同生物中，可能只有GR或TrxR；GPX和TPX是GSH氧化酶，GCL是谷胱甘肽合成酶。GT是谷胱甘肽降解酶。

AsA和DHA的測定好是新鮮樣，Gal LDH動物中不含有，是AsA合成的關(guān)鍵酶。AAO和APX是AsA的氧化酶，兩者不同之處在于APX需要過氧化氫的參與；MDHAR和DHAR是AsA的再生酶。

1. 樣品盡可能液氮速凍后保存在-80℃冰箱中，以減少酶活性變化。粗酶液提取全程應(yīng)該保持低溫，包括樣品稱量應(yīng)該迅速完成，粗酶液提取應(yīng)該在冰浴中進(jìn)行，離心應(yīng)該在4℃左右進(jìn)行，測定過程中粗酶液應(yīng)該保存在冰浴中。此外，粗酶液提取后應(yīng)該盡快完成測定，通常不可以留到第二天測定。

2. 在對樣本進(jìn)行提取時，加完提取液好不要用液氮研磨，而且樣本不要反復(fù)凍融，這樣會破壞酶的活性。凍融會影響蛋白的三級結(jié)構(gòu)，對酶活性有一定影響，對于動植物組織，可以直接研磨，對于細(xì)胞或細(xì)菌之類的樣品，可以使用超聲波。

3. 提取要根據(jù)不同樣本特點(diǎn)進(jìn)行，原則是提取充分和保持活性。對于有細(xì)胞壁的樣品，一定要注意破壁方法；對于分布于特定細(xì)胞器中的成分，原則上先分離該細(xì)胞器，然后再從收集的細(xì)胞器中進(jìn)一步提取需要的成分。對于存在于膜上的成分，要注意如何分離，去垢劑的使用要小心，以避免酶失活。使用超聲波破碎，一定要防止溫度升高導(dǎo)致失活。特殊樣品可以查閱相關(guān)文獻(xiàn)，參考前人提取方法，或者咨詢我們的研發(fā)專家。

通常可以按比例縮小，如說明書中是約0.1g組織加1ml提取液，可以等比例縮小，如0.05g組織加0.5ml提取液提取。后續(xù)操作不變。此外，對于數(shù)量少、酶活性低的樣品，一方面可以減少提取液體積，另一方面還可以延長反應(yīng)時間。