蛋白酶抑制劑是指與蛋白酶分子活性中心上的一些基團(tuán)結(jié)合，使蛋白酶活力下降甚至消失但不使蛋白變性的物質(zhì)，并維持原有的蛋白間相互作用。細(xì)胞或組織提取物等樣品中含有許多內(nèi)源性的蛋白 酶、磷酸酶等，容易導(dǎo)致提取物中的蛋白降解或去修飾，從而影響后續(xù)的蛋白檢測。因此在提取物等樣品中添加適當(dāng)?shù)牡鞍酌浮⒘姿崦傅纫种苿┦欠乐沟?/span>白降解和去修飾的有效方法。
蛋白酶抑制劑混合液(100X) 是一種通用型用于細(xì)胞或組織蛋白提取等的蛋白酶抑制劑混合物，主要由 AEBSF、Aprotin in、Bestatin、E-64、Leupep tin、Pep statin A等組成，不含EDTA。本產(chǎn)品 可以有效抑制常規(guī)細(xì)胞或組織提取物中的各種蛋白酶活性，如絲氨酸蛋白酶、氨基肽酶、半胱氨酸 蛋白酶、蘇氨酸、胃蛋白酶、胰蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶和木瓜蛋白酶等。其中 AEBSF 是一種水溶 性的絲氨酸蛋白酶不可逆抑制劑，其抑制常數(shù)與PMSF的抑制常數(shù)相似，可以有效抑制胰蛋白酶、糜蛋白酶、纖溶酶、激肽釋放酶和凝血酶等蛋白酶，作為PMSF的替代物，AEBSF 的毒性更低、水 溶性和水溶液穩(wěn)定性更好。Aprotin in 是絲氨酸蛋白酶的競爭性可逆抑制劑；Bestatin是氨基肽酶可逆抑制劑；E64 是半胱氨酸蛋白酶不可逆抑制劑；Leupep tin 是絲氨酸和半胱氨酸蛋白酶可逆抑制劑。
本產(chǎn)品使用便捷，通常以1:100的比例將蛋白酶抑制劑混合液(100X)加入裂解液中，即可用于常規(guī)的細(xì)胞或組織蛋白的提取，并有效抑制蛋白降解，提取出的蛋白可以用于Western Blot、免疫共沉淀等試驗。
1. 開蓋前請低速離心一下，以便將黏附于管壁的液體甩至管底。
2. 本蛋白酶抑制劑混合液為100X的儲存液，使用時按照1:100的比例加入到裂解液中(例如1ml裂解液中加入10ul蛋白酶抑制劑混合液)，混勻后即可使用。
3. 待所需的抑制劑添加完畢并混勻后，就可以開始進(jìn)行常規(guī)細(xì)胞或組織的裂解和蛋白提取。
1. 本產(chǎn)品可以適當(dāng)分裝后保存，并應(yīng)在臨使用前添加到裂解液等適當(dāng)溶液中。
2. 本產(chǎn)品保存時盡量減少反復(fù)凍融的次數(shù)，以免失效。
3. 本產(chǎn)品未添加 EDTA，可以自行選擇性加入使用。若后續(xù)用于檢測提取液中金屬蛋白酶活性，則不宜添加EDTA。
4. 本產(chǎn)品中含有的蛋白酶抑制劑對人體有害，操作時請小心，并注意有效防護(hù)以避免直接接觸人體或吸入體內(nèi)。
5. 含有蛋白酶抑制劑混合液的裂解液宜現(xiàn)用現(xiàn)配，不宜配制后凍存待后續(xù)使用。
6. 本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
7. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
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答：可能的原因有：
1、目的蛋白有多個修飾位點(diǎn)，本身可以呈現(xiàn)多條帶，建議查閱文獻(xiàn)或進(jìn)行生物信息學(xué)分析，獲得蛋白序列的修飾位點(diǎn)信息，通過去修飾確定蛋白實際大小；
2、樣本處理過程中目的蛋白發(fā)生降解,建議加入蛋白酶抑制劑；樣本處理時在冰上操作；
3、雜蛋白多，建議處理目的蛋白；
4、抗體特異性不強(qiáng)，建議使用特異性強(qiáng)的抗體；
5、抗體孵育時間過久，建議減少抗體孵育時間；
6、二抗與抗原有交叉反應(yīng)，建議選擇合適的封閉物；
7、二聚體或多聚體存在，建議增加蛋白質(zhì)變性過程及強(qiáng)度；
8、底物顯色與曝光時間過長，建議縮短顯色及曝光的時間。
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