Western及IP裂解液是一種在非變性條件下裂解細胞或組織樣品從而制備蛋白樣品的裂解液。本裂解液裂解的細胞或組織樣品,可以用于PAGE,Western,免疫沉淀(IP)、免疫共沉淀(co-IP)和ELISA等。
本產品可以用于動物、植物的細胞或組織樣品,也可以用于真菌或細菌樣品。
Western及IP裂解液的主要成分為Tris(pH7.5),NaCl,1% Triton X-100,以及焦磷酸鈉,β-甘油磷酸,EDTA,原釩酸鈉,leupeptin等多種蛋白酶抑制劑,可以有效抑制蛋白的降解,并維持原有的蛋白間相互作用。
用Western及IP裂解液裂解得到的蛋白樣品,可以用BCA蛋白濃度測定試劑盒測定蛋白濃度。由于含有較高濃度的Triton X-100等干擾物質,不能用Bradford法測定由本裂解液裂解得到樣品的蛋白濃度。
保存條件:-20℃保存,一年有效。
貨號 名稱 規格
PMK0209 Western及IP裂解液 100ml/500ml
a.每袋粉劑可配制成 1000ml 的標準濃度的 Western 轉膜緩沖液。
b.配制時用去離子水或雙蒸水作為溶劑。同時備有無水甲醇。
c.將包裝袋中的粉劑全部溶于 600ml 的去離子水或者蒸餾水中,并定容至 800ml。
d.使用前再加入 200ml 甲醇混勻。使用前 4℃預冷,轉膜效果更好。沒有用完的快速轉膜液可在常溫或 4℃保
存,通常兩周內可以正常使用。當轉膜液顏色變為淺棕色或黃褐色時,應該丟棄。
e.400mA 恒流,20-25 分鐘完成轉膜,推薦使用恒流轉膜。對于大分子量蛋白,可適當增加轉膜時間。由于使
用本產品時產熱少,轉膜時可以僅在轉膜槽內用冰盒降溫即可。如果同時將整個轉膜槽置于冰浴中降溫,轉
膜效果更佳。
復融后的試劑請及時使用,避免裂解液中有效成分失效。
本產品僅限于專業人員的科學研究用,不得用于臨床診斷或治療,不得用于食品或藥品,不得存放于普通住宅內。
為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。
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答:可能的原因有:
1、目的蛋白有多個修飾位點,本身可以呈現多條帶,建議查閱文獻或進行生物信息學分析,獲得蛋白序列的修飾位點信息,通過去修飾確定蛋白實際大??;
2、樣本處理過程中目的蛋白發生降解,建議加入蛋白酶抑制劑;樣本處理時在冰上操作;
3、雜蛋白多,建議處理目的蛋白;
4、抗體特異性不強,建議使用特異性強的抗體;
5、抗體孵育時間過久,建議減少抗體孵育時間;
6、二抗與抗原有交叉反應,建議選擇合適的封閉物;
7、二聚體或多聚體存在,建議增加蛋白質變性過程及強度;
8、底物顯色與曝光時間過長,建議縮短顯色及曝光的時間。
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