該試劑盒采用雙抗夾心酶聯免疫吸附法原理。酶標板預包被親和純化的抗人VEGF的抗體。將含有人VEGF 的樣品或標準品加入到酶標板中，與包被抗體反應。再加入生物素標記的檢測抗體，并與酶標板上捕獲的人VEGF結合。接著，加入鏈霉親和素-辣根過氧化物酶（SA-HRP）以形成固相抗體-人VEGF -生物素標記抗體-SA-HRP的夾心復合物。然后，將TMB溶液加入孔中并進行孵育，酶促反應產生藍色物質，加入終止液后，變成黃色。在450nm 波長下測定吸光值。后通過建立標準曲線，根據OD值來計算樣品中人VEGF的濃度。
酶標儀（能測450nm處的吸光度）
多通道移液器或自動洗板機
恒溫箱、低溫離心機
可調節式移液槍及槍頭
去離子水
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可能原因 解決措施是
1，標準品稀釋不正確。 確保標準品按照推薦方法溶解和稀釋。
2，移液不準確。 定期校準移液器并檢查槍頭密封性。
3，反應液蒸發。 用封板膜密封酶標板。
4，洗板不徹底。 足夠的洗滌次數和加入足量洗滌液。
5，孔底有異物。 讀數前清潔板底。
可能原因 解決措施是
1，試劑反應不充分 確保孵育時間并按推薦溫度孵育
2，試劑體積添加不足 檢查移液器并嚴格按照操作步驟操作
3，稀釋不正確 檢查試劑稀釋步驟
4，酶結合物失活 混合酶結合物和底物，通過顯色反應檢查
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