該試劑盒采用雙抗夾心酶聯(lián)免疫吸附法原理。酶標(biāo)板預(yù)包被親和純化的抗小鼠IL-1β的抗體。將含有小鼠IL-1β 的樣品或標(biāo)準(zhǔn)品加入到酶標(biāo)板中，與包被抗體反應(yīng)。再加入生物素標(biāo)記的檢測(cè)抗體，并與酶標(biāo)板上捕獲的小鼠IL-1β結(jié)合。接著，加入鏈霉親和素-辣根過(guò)氧化物酶（SA-HRP）以形成固相抗體-小鼠IL-1β-生物素標(biāo)記抗體-SA-HRP的夾心復(fù)合物。然后，將 TMB 溶液加入孔中并進(jìn)行孵育，酶促反應(yīng)產(chǎn)生藍(lán)色物質(zhì)，加入終止液后，變成黃色。在450nm 波長(zhǎng)下測(cè)定吸光值。后通過(guò)建立標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù) OD 值來(lái)計(jì)算樣品中小鼠IL-1β的濃度。
酶標(biāo)儀（能測(cè) 450nm 處的吸光度）
多通道移液器或自動(dòng)洗板機(jī)
恒溫箱、低溫離心機(jī)
可調(diào)節(jié)式移液槍及槍頭
去離子水
1. 實(shí)驗(yàn)過(guò)程中請(qǐng)穿戴實(shí)驗(yàn)服、口罩和乳膠手套。請(qǐng)按照生物實(shí)驗(yàn)室的國(guó)家安全規(guī)定進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，尤其是在檢測(cè)血樣或其他體液時(shí)。終止液有一定的腐蝕性，操作時(shí)請(qǐng)做好防護(hù)措施。
2. 本試劑盒僅用于實(shí)驗(yàn)室科學(xué)研究，如果本試劑盒用于臨床診斷或任何其他用途，我們將不對(duì)任何后果負(fù)責(zé)。
3. 本試劑盒應(yīng)在有效期內(nèi)使用，并請(qǐng)嚴(yán)格按照說(shuō)明書進(jìn)行存儲(chǔ)。收到試劑盒后，未開(kāi)封的試劑盒可在2-8℃下保存1個(gè)月。如果試劑盒在1個(gè)月內(nèi)不使用，請(qǐng)?jiān)谑盏皆噭┖泻螅瑢⒚總€(gè)組件分別存放在上表中指示的溫度下。
4. 新打開(kāi)的ELISA酶標(biāo)板可能含有水霧樣物質(zhì)，此為正常現(xiàn)象，不會(huì)對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果產(chǎn)生任何影響。未用完的板條應(yīng)立即放回裝有干燥劑的鋁箔袋中，重新密封并在-20℃下存儲(chǔ)。
5. 不同批次號(hào)、不同廠家之間的組分不要混用；否則，可能導(dǎo)致結(jié)果異常。
6. 勤換吸頭，避免各組分之間的交叉污染。
7. 溶解含有蛋白質(zhì)溶液時(shí)，應(yīng)始終避免起泡。
8. 不得重復(fù)使用稀釋后的工作液。
9. 為了得到準(zhǔn)確的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，在孵育過(guò)程中，必須確保封板膜將酶標(biāo)板密封。
10. 在使用自動(dòng)洗板機(jī)時(shí)，添加清洗緩沖液后，在清洗步驟之間添加30秒的浸泡時(shí)間可提高分析精度。
11. 底物溶液保存過(guò)程中應(yīng)為無(wú)色，加入到酶標(biāo)板中之后底物溶液應(yīng)從無(wú)色變?yōu)闈u變藍(lán)色。
12. 終止液應(yīng)按照與加底物溶液(TMB)相同的順序添加到酶標(biāo)板中。添加終止液后，孔中溶液的顏色將從藍(lán)色變?yōu)辄S色。綠色的孔表明終止液未與底物溶液充分混合，應(yīng)輕拍孔板使其混勻。
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可能原因 解決措施是
1，標(biāo)準(zhǔn)品稀釋不正確。 確保標(biāo)準(zhǔn)品按照推薦方法溶解和稀釋。
2，移液不準(zhǔn)確。 定期校準(zhǔn)移液器并檢查槍頭密封性。
3，反應(yīng)液蒸發(fā)。 用封板膜密封酶標(biāo)板。
4，洗板不徹底。 足夠的洗滌次數(shù)和加入足量洗滌液。
5，孔底有異物。 讀數(shù)前清潔板底。
可能原因 解決措施是
1，試劑反應(yīng)不充分 確保孵育時(shí)間并按推薦溫度孵育
2，試劑體積添加不足 檢查移液器并嚴(yán)格按照操作步驟操作
3，稀釋不正確 檢查試劑稀釋步驟
4，酶結(jié)合物失活 混合酶結(jié)合物和底物，通過(guò)顯色反應(yīng)檢查
可能原因 解決措施是
1，酶標(biāo)儀設(shè)置不正確 檢查儀器波長(zhǎng)
2，沒(méi)加終止液 加入適量終止液
3，讀板時(shí)等待時(shí)間太長(zhǎng) 及時(shí)讀板
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