本試劑盒采用雙抗體夾心ELISA 法。用抗小鼠IgG2b抗體包被于酶標(biāo)板上，實(shí)驗(yàn)時樣品（或標(biāo)準(zhǔn)品）中的小鼠IgG2b 會與包被抗體結(jié)合。后依次加入生物素化的抗小鼠IgG2b 抗體和辣根過氧化物酶標(biāo)記的親和素，抗小鼠 IgG2b 抗體與結(jié)合在包被抗體上的小鼠IgG2b結(jié)合，生物素與親和素特異性結(jié)合而形成免疫復(fù)合物，游離的成分被洗去。加入顯色底物(TMB)，TMB 在辣根過氧化物酶的催化下呈現(xiàn)藍(lán)色，加終止液后變成黃色。用酶標(biāo)儀在450nm 波長處測OD 值，IgG2b濃度與OD450值之間呈正比，通過繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線計算出樣品中IgG2b的濃度。
未拆封的試劑盒可在 2-8 ℃保存 6 個月；如果開封使用后，請按照下表中的條件分別保存各組分。
酶標(biāo)儀（能測 450nm 處的吸光度）
多通道移液器或自動洗板機(jī)
恒溫箱、低溫離心機(jī)
可調(diào)節(jié)式移液槍及槍頭
去離子水
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可能原因 解決措施是
1，試劑反應(yīng)不充分 確保孵育時間并按推薦溫度孵育
2，試劑體積添加不足 檢查移液器并嚴(yán)格按照操作步驟操作
3，稀釋不正確 檢查試劑稀釋步驟
4，酶結(jié)合物失活 混合酶結(jié)合物和底物，通過顯色反應(yīng)檢查
可能原因 解決措施是
1，標(biāo)準(zhǔn)品稀釋不正確。 確保標(biāo)準(zhǔn)品按照推薦方法溶解和稀釋。
2，移液不準(zhǔn)確。 定期校準(zhǔn)移液器并檢查槍頭密封性。
3，反應(yīng)液蒸發(fā)。 用封板膜密封酶標(biāo)板。
4，洗板不徹底。 足夠的洗滌次數(shù)和加入足量洗滌液。
5，孔底有異物。 讀數(shù)前清潔板底。
可能原因 解決措施是
1，酶標(biāo)儀設(shè)置不正確 檢查儀器波長
2，沒加終止液 加入適量終止液
3，讀板時等待時間太長 及時讀板
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