該試劑盒采用雙抗夾心酶聯(lián)免疫吸附法原理。酶標板預包被親和純化的抗大鼠IL-10的抗體。將含有大鼠IL-10 的樣品或標準品加入到酶標板中，與包被抗體反應(yīng)。再加入生物素標記的檢測抗體，并與酶標板上捕獲的大鼠IL-10結(jié)合。接著，加入鏈霉親和素-辣根過氧化物酶（SA-HRP）以形成固相抗體-大鼠IL-10-生物素標記抗體-SA-HRP的夾心復合物。然后，將TMB溶液加入孔中并進行孵育，酶促反應(yīng)產(chǎn)生藍色物質(zhì)，加入終止液后，變成黃色。在450nm 波長下測定吸光值。后通過建立標準曲線，根據(jù)OD值來計算樣品中大鼠IL-10的濃度。
未拆封的試劑盒可在 2-8 ℃保存 6 個月；如果開封使用后，請按照下表中的條件分別保存各組分。
酶標儀（能測450nm處的吸光度）
多通道移液器或自動洗板機
恒溫箱、低溫離心機
可調(diào)節(jié)式移液槍及槍頭
去離子水
1. 實驗過程中請穿戴實驗服、口罩和乳膠手套。請按照生物實驗室的國家安全規(guī)定進行實驗，尤其是在檢測血樣或其他體液時。終止液有一定的腐蝕性，操作時請做好防護措施。
2. 本試劑盒僅用于實驗室科學研究，如果本試劑盒用于臨床診斷或任何其他用途，我們將不對任何后果負責。
3. 本試劑盒應(yīng)在有效期內(nèi)使用，并請嚴格按照說明書進行存儲。收到試劑盒后，未開封的試劑盒可在2-8℃下保存1個月。如果試劑盒在1個月內(nèi)不使用，請在收到試劑盒后，將每個組件分別存放在上表中指示的溫度下。
4. 新打開的ELISA酶標板可能含有水霧樣物質(zhì)，此為正常現(xiàn)象，不會對實驗結(jié)果產(chǎn)生任何影響。未用完的板條應(yīng)立即放回裝有干燥劑的鋁箔袋中，重新密封并在-20℃下存儲。
5. 不同批次號、不同廠家之間的組分不要混用；否則，可能導致結(jié)果異常。
6. 勤換吸頭，避免各組分之間的交叉污染。
7. 溶解含有蛋白質(zhì)溶液時，應(yīng)始終避免起泡。
8. 不得重復使用稀釋后的工作液。
9. 為了得到準確的實驗結(jié)果，在孵育過程中，必須確保封板膜將酶標板密封。
10. 在使用自動洗板機時，添加清洗緩沖液后，在清洗步驟之間添加30秒的浸泡時間可提高分析精度。
11. 底物溶液保存過程中應(yīng)為無色，加入到酶標板中之后底物溶液應(yīng)從無色變?yōu)闈u變藍色。
12. 終止液應(yīng)按照與加底物溶液(TMB)相同的順序添加到酶標板中。添加終止液后，孔中溶液的顏色將從藍色變?yōu)辄S色。綠色的孔表明終止液未與底物溶液充分混合，應(yīng)輕拍孔板使其混勻。
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可能原因 解決措施是
1，標準品稀釋不正確。 確保標準品按照推薦方法溶解和稀釋。
2，移液不準確。 定期校準移液器并檢查槍頭密封性。
3，反應(yīng)液蒸發(fā)。 用封板膜密封酶標板。
4，洗板不徹底。 足夠的洗滌次數(shù)和加入足量洗滌液。
5，孔底有異物。 讀數(shù)前清潔板底。
可能原因 解決措施是
1，試劑反應(yīng)不充分 確保孵育時間并按推薦溫度孵育
2，試劑體積添加不足 檢查移液器并嚴格按照操作步驟操作
3，稀釋不正確 檢查試劑稀釋步驟
4，酶結(jié)合物失活 混合酶結(jié)合物和底物，通過顯色反應(yīng)檢查
可能原因 解決措施是
1，酶標儀設(shè)置不正確 檢查儀器波長
2，沒加終止液 加入適量終止液
3，讀板時等待時間太長 及時讀板
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