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該試劑盒采用雙抗夾心酶聯(lián)免疫吸附法原理。酶標(biāo)板預(yù)包被親和純化的抗大鼠IL-17A的抗體。將含有大鼠IL-17A的樣品或標(biāo)準(zhǔn)品加入到酶標(biāo)板中，與包被抗體反應(yīng)。再加入生物素標(biāo)記的檢測(cè)抗體，并與酶標(biāo)板上捕獲的大鼠IL-17A結(jié)合。接著，加入鏈霉親和素-辣根過(guò)氧化物酶（SA-HRP）以形成固相抗體-大鼠IL-17A-生物素標(biāo)記抗體-SA-HRP的夾心復(fù)合物。然后，將 TMB 溶液加入孔中并進(jìn)行孵育，酶促反應(yīng)產(chǎn)生藍(lán)色物質(zhì)，加入終止液后，變成黃色。在 450nm 波長(zhǎng)下測(cè)定吸光值。后通過(guò)建立標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù) OD 值來(lái)計(jì)算樣品中大鼠IL-17A的濃度。
酶標(biāo)儀（能測(cè) 450nm 處的吸光度）
多通道移液器或自動(dòng)洗板機(jī)
恒溫箱、低溫離心機(jī)
可調(diào)節(jié)式移液槍及槍頭
去離子水
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可能原因 解決措施是
1，標(biāo)準(zhǔn)品稀釋不正確。 確保標(biāo)準(zhǔn)品按照推薦方法溶解和稀釋。
2，移液不準(zhǔn)確。 定期校準(zhǔn)移液器并檢查槍頭密封性。
3，反應(yīng)液蒸發(fā)。 用封板膜密封酶標(biāo)板。
4，洗板不徹底。 足夠的洗滌次數(shù)和加入足量洗滌液。
5，孔底有異物。 讀數(shù)前清潔板底。
可能原因 解決措施是
1，試劑反應(yīng)不充分 確保孵育時(shí)間并按推薦溫度孵育
2，試劑體積添加不足 檢查移液器并嚴(yán)格按照操作步驟操作
3，稀釋不正確 檢查試劑稀釋步驟
4，酶結(jié)合物失活 混合酶結(jié)合物和底物，通過(guò)顯色反應(yīng)檢查
可能原因 解決措施是
1，酶標(biāo)儀設(shè)置不正確 檢查儀器波長(zhǎng)
2，沒(méi)加終止液 加入適量終止液
3，讀板時(shí)等待時(shí)間太長(zhǎng) 及時(shí)讀板
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