一氧化氮（Nitric Oxide，NO）是一種極不穩定的生物自由基，分子小，結構簡單，可快速透過生物膜擴散，作為一種新型的生物信使分子，在細胞間及細胞內傳遞信號，在機體的生理、病理過程中起著重要的作用。其廣泛分布于生物體內神經、循環、呼吸、消化、泌尿生殖等系統中，特別是神經組織中較豐富。NO易被氧化成亞硝酸鹽和硝酸鹽，因此，通常要測定亞硝酸鹽和硝酸鹽的總量來推算出總的一氧化氮的量。本試劑盒采用改進的格里斯法將硝酸鹽還原為亞硝酸鹽后，即可準確測定NO的生成量。格里斯分析的機理概括為重氮類之間的偶氮耦合，重氮類是由磺胺和 NO2-和 N-（1-萘基）乙二胺二鹽酸鹽產生的，產物在540nm處有特征吸收峰，測定其吸光值，可以計算NO含量。
酶標儀或可見光分光光度計（能測 540nm處的吸光值）及恒溫培養箱
96孔板或微量玻璃比色皿、可調節式移液槍及槍頭
去離子水
勻漿器（如果是組織樣本）
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答：可能的原因有：
1、目的蛋白有多個修飾位點，本身可以呈現多條帶，建議查閱文獻或進行生物信息學分析，獲得蛋白序列的修飾位點信息，通過去修飾確定蛋白實際大小；
2、樣本處理過程中目的蛋白發生降解,建議加入蛋白酶抑制劑；樣本處理時在冰上操作；
3、雜蛋白多，建議處理目的蛋白；
4、抗體特異性不強，建議使用特異性強的抗體；
5、抗體孵育時間過久，建議減少抗體孵育時間；
6、二抗與抗原有交叉反應，建議選擇合適的封閉物；
7、二聚體或多聚體存在，建議增加蛋白質變性過程及強度；
8、底物顯色與曝光時間過長，建議縮短顯色及曝光的時間。
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