輔酶ⅠNAD(H)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養細胞中，包括NAD+(氧化型)和NADH(還原型)兩種形式。NAD+是糖酵解（EMP）和三羧酸循環（TCA）的主要氫受體，生成的NADH經呼吸電子鏈（ETC）傳遞把電子交給氧，在合成ATP的同時，形成大量的ROS，同時NADH再生為NAD+。糖、脂、蛋白質三大代謝物質分解中的氧化反應絕大部分通過這一體系完成。NAD+在細胞和體內發揮著重要的功能，其合成和降解及其產物參與細胞凋亡、代謝調控和基因表達的調控等，并且NAD+的減少是細胞死亡的主要因素之一。NAD+在調節細胞氧化還原狀態方面的重要性以及調控信號通路及轉錄方面的功能，使得NAD+及其合成和消耗的酶成為多種疾病的潛在藥物靶點。本試劑盒提供了一種簡單的比色法來檢測細胞、組織或其它樣品中NAD+(氧化型輔酶Ⅰ)和NADH(還原型輔酶Ⅰ)各自的量。其原理是分別用酸性和堿性提取液提取樣品中NAD+和NADH，基于酶循環反應（不識別NADP+/NADPH），在這一反應過程中NAD+被還原為NADH，NADH將WST-8還原生成橙黃色formazan（甲臜），在450nm左右檢測有大吸收峰。反應體系中生成的formazan與樣品中總的NAD+或NADH的總量呈正比關系。
酶標儀或可見分光光度計（能測450nm處的吸光度）
水浴鍋、制冰機，低溫離心機
96孔板或微量玻璃比色皿，可調節式移液槍及槍頭
去離子水
勻漿器（如果是組織樣本）
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答：可能的原因有：
1、膠濃度不對，不同濃度的膠跑出的蛋白條帶的位置可能有所偏差，可以調整濃度；
2、抗體孵育不充分,建議增加抗體濃度，延長孵育時間；
3、酶失活，建議直接將酶和底物進行混合，如果不顯色則說明酶失活了。選擇在有效期內、有活性的酶聯物；
4、目的蛋白存在翻譯后修飾或剪切體，建議查詢相關文獻確定；
5、標本中不含靶蛋白或靶蛋白含量太低，建議設置陽性對照比對結果，增加標本上樣量。
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