葡萄糖(C6H12O6, FW:180.16)是一種主要的生物燃料源,用于產生通用的能量分子ATP。葡萄糖不僅是細胞能量代謝的主要底物,而且其代謝中間產物是生物合成的重要底物。植物可通過光合作用產生葡萄糖。就哺乳動物而言,葡萄糖不僅是大腦神經系統、肌肉、脂肪組織等的唯一能源,而且與還原性輔酶、乳糖和乳脂的合成密切相關。由于葡萄糖在代謝中的重要性,葡萄糖水平是許多代謝紊亂的關鍵診斷參數。葡萄糖水平異常與幾種代謝功能異常有關,如低血糖、高血糖和糖尿病。本試劑盒可檢測各種生物樣本中的葡萄糖含量,其原理是葡萄糖氧化酶催化葡萄糖氧化生成葡萄糖酸,并產生過氧化氫;過氧化物酶催化過氧化氫氧化 4-氨基安替比林和酚縮合成紅色醌類化合物,其大吸收峰在 505nm,在一定的濃度范圍內葡萄糖含量與505nm吸光度成線性關系,根據標準曲線即可計算出樣品中葡萄糖的含量。
酶標儀或可見光分光光度計(能測505nm處的吸光度)及水浴鍋
96孔板或微量玻璃比色皿、可調節式移液槍及槍頭
低溫離心機
去離子水、PBS
勻漿器(如果是組織樣本)
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答:可能的原因有:
1、目的蛋白有多個修飾位點,本身可以呈現多條帶,建議查閱文獻或進行生物信息學分析,獲得蛋白序列的修飾位點信息,通過去修飾確定蛋白實際大小;
2、樣本處理過程中目的蛋白發生降解,建議加入蛋白酶抑制劑;樣本處理時在冰上操作;
3、雜蛋白多,建議處理目的蛋白;
4、抗體特異性不強,建議使用特異性強的抗體;
5、抗體孵育時間過久,建議減少抗體孵育時間;
6、二抗與抗原有交叉反應,建議選擇合適的封閉物;
7、二聚體或多聚體存在,建議增加蛋白質變性過程及強度;
8、底物顯色與曝光時間過長,建議縮短顯色及曝光的時間。
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