山梨醇脫氫酶(Sorbitoldehydrogenase,SH, EC 1.1.1.14)又稱艾杜醇脫氫酶(Iditol dehydro-genase,ID),能可逆地催化D-山梨醇脫氫生成D-果糖,是調控生物體內山梨醇含量的關健酶之一。山梨醇脫氫酶廣泛存在于動物、植物、微生物和體外培養細胞中。人體內此酶主要分布于肝臟,腎、腦、心、脾等組織中含量極少,血清中此酶活力很低,如酶活力升高,強烈提示肝損害。本試劑盒提供了一種簡單、方便、快速的山梨醇脫氫酶活性檢測方法,其原理是山梨醇脫氫酶催化山梨醇脫氫生成果糖,同時還原NAD+生成NADH,NADH在340nm處有特征吸收峰,測定340nm吸光度增加速率可以計算山梨醇脫氫酶活性。
酶標儀或分光光度計(能測340nm處的吸光度)
96孔UV板或微量石英比色皿、可調節式移液槍及槍頭
水浴鍋、制冰機,低溫離心機
去離子水
勻漿器(如果是組織樣本)
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答:可能的原因有:
1、目的蛋白有多個修飾位點,本身可以呈現多條帶,建議查閱文獻或進行生物信息學分析,獲得蛋白序列的修飾位點信息,通過去修飾確定蛋白實際大小;
2、樣本處理過程中目的蛋白發生降解,建議加入蛋白酶抑制劑;樣本處理時在冰上操作;
3、雜蛋白多,建議處理目的蛋白;
4、抗體特異性不強,建議使用特異性強的抗體;
5、抗體孵育時間過久,建議減少抗體孵育時間;
6、二抗與抗原有交叉反應,建議選擇合適的封閉物;
7、二聚體或多聚體存在,建議增加蛋白質變性過程及強度;
8、底物顯色與曝光時間過長,建議縮短顯色及曝光的時間。
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