還原糖廣泛存在于動物、植物、微生物和培養細胞中。植物體內的還原糖主要包括葡萄糖、果糖和麥芽糖等,其中葡萄糖和果糖不僅是呼吸作用的主要底物,也是進一步合成蔗糖、淀粉和纖維素的底物。本試劑盒可檢測各種生物樣本中還原糖含量,其原理是在堿性溶液中 3,5-二硝基水楊酸能夠被還原糖還原生成棕紅色的氨基化合物,在540nm 有特征吸收峰,在一定的濃度范圍內,還原糖含量與540nm吸光度成線性關系,根據標準曲線,即可計算出樣品中還原糖的含量。
酶標儀或可見分光光度計(能測540nm處的吸光度)以及水浴鍋
96孔板或微量玻璃比色皿,可調節式移液槍及槍頭
離心機
去離子水
勻漿器(如果是組織樣本)
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答:可能的原因有:
1、目的蛋白有多個修飾位點,本身可以呈現多條帶,建議查閱文獻或進行生物信息學分析,獲得蛋白序列的修飾位點信息,通過去修飾確定蛋白實際大小;
2、樣本處理過程中目的蛋白發生降解,建議加入蛋白酶抑制劑;樣本處理時在冰上操作;
3、雜蛋白多,建議處理目的蛋白;
4、抗體特異性不強,建議使用特異性強的抗體;
5、抗體孵育時間過久,建議減少抗體孵育時間;
6、二抗與抗原有交叉反應,建議選擇合適的封閉物;
7、二聚體或多聚體存在,建議增加蛋白質變性過程及強度;
8、底物顯色與曝光時間過長,建議縮短顯色及曝光的時間。
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