CL(EC 3.2.1.4)存在于細(xì)菌、真菌和動物體內(nèi),能夠催化羧甲基纖維素降解,是一類可廣泛應(yīng)用于醫(yī)藥、食品、棉紡、環(huán)保及可再生資源利用等領(lǐng)域的酶制劑。本試劑盒采用蒽酮比色法測定CL催化羧甲基纖維素鈉降解產(chǎn)生的還原糖的含量,計(jì)算CL酶活。
酶標(biāo)儀或可見分光光度計(jì)(能測620nm處的吸光度)
96孔板或微量玻璃比色皿,可調(diào)節(jié)式移液槍及槍頭
制冰機(jī),離心機(jī),水浴鍋
去離子水,濃硫酸
勻漿器
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答:可能的原因有:
1、目的蛋白有多個(gè)修飾位點(diǎn),本身可以呈現(xiàn)多條帶,建議查閱文獻(xiàn)或進(jìn)行生物信息學(xué)分析,獲得蛋白序列的修飾位點(diǎn)信息,通過去修飾確定蛋白實(shí)際大小;
2、樣本處理過程中目的蛋白發(fā)生降解,建議加入蛋白酶抑制劑;樣本處理時(shí)在冰上操作;
3、雜蛋白多,建議處理目的蛋白;
4、抗體特異性不強(qiáng),建議使用特異性強(qiáng)的抗體;
5、抗體孵育時(shí)間過久,建議減少抗體孵育時(shí)間;
6、二抗與抗原有交叉反應(yīng),建議選擇合適的封閉物;
7、二聚體或多聚體存在,建議增加蛋白質(zhì)變性過程及強(qiáng)度;
8、底物顯色與曝光時(shí)間過長,建議縮短顯色及曝光的時(shí)間。
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