α-GC(EC 3.2.1.20)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養細胞中,催化水解芳基或烴基與糖基之間的α-糖苷鍵生成葡萄糖,不僅與細胞壁的松弛或加固有關,而且與細胞識別和一些信號分子產生密切相關。本試劑盒提供了一種簡單易用的比色法,用于分析各種生物樣品中α-GC的活性。其原理是α-GC分解對-硝基苯-β-D-吡喃葡萄糖苷生成對-硝基苯酚,后者在400nm有大吸收峰,通過測定吸光值升高速率來計算α-GC活性。
酶標儀或可見光分光光度計(能測400nm處的吸光度)及水浴鍋
96孔板或微量玻璃比色皿、可調節式移液槍及槍頭
離心機、制冰機
去離子水
勻漿器(如果是組織樣本)
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答:可能的原因有:
1、目的蛋白有多個修飾位點,本身可以呈現多條帶,建議查閱文獻或進行生物信息學分析,獲得蛋白序列的修飾位點信息,通過去修飾確定蛋白實際大??;
2、樣本處理過程中目的蛋白發生降解,建議加入蛋白酶抑制劑;樣本處理時在冰上操作;
3、雜蛋白多,建議處理目的蛋白;
4、抗體特異性不強,建議使用特異性強的抗體;
5、抗體孵育時間過久,建議減少抗體孵育時間;
6、二抗與抗原有交叉反應,建議選擇合適的封閉物;
7、二聚體或多聚體存在,建議增加蛋白質變性過程及強度;
8、底物顯色與曝光時間過長,建議縮短顯色及曝光的時間。
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