β-葡萄糖苷酶(β-D-Glucosidase,EC3.2.1.21),別名纖維二糖酶(cellobias,CB或β-G)、龍膽二糖酶和苦杏仁苷酶。它屬于纖維素酶類,是纖維素分解酶系中的重要組成成分,能夠催化β-糖苷鍵水解,同時釋放出β-D-葡萄糖和相應的配基。β-GC廣泛存在于動物、植物、微生物和培養細胞中,在植物的種子和微生物中尤為普遍,具有多方面生理作用:在纖維素的糖化作用中,β-GC負責進一步水解纖維素二糖和纖維素寡糖生成葡萄糖;β-GC水解萜烯類香氣前驅體,使糖苷鍵合態變成游離態,從而產生香味。β-GC能夠水解植物體內野黑櫻苷,釋放HCN,從而防止昆蟲取食。本試劑盒提供了一種簡單易用的比色法,用于分析各種生物樣品中β-GC的活性。其原理是β-GC分解對-硝基苯-β-D-吡喃葡萄糖苷生成對-硝基苯酚,后者在400nm有大吸收峰,通過測定吸光值升高速率來計算β-GC活性。
酶標儀或可見光分光光度計(能測400nm處的吸光度)及水浴鍋
96孔板或微量玻璃比色皿、可調節式移液槍及槍頭
離心機、制冰機
去離子水
勻漿器(如果是組織樣本)
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答:可能的原因有:
1、目的蛋白有多個修飾位點,本身可以呈現多條帶,建議查閱文獻或進行生物信息學分析,獲得蛋白序列的修飾位點信息,通過去修飾確定蛋白實際大小;
2、樣本處理過程中目的蛋白發生降解,建議加入蛋白酶抑制劑;樣本處理時在冰上操作;
3、雜蛋白多,建議處理目的蛋白;
4、抗體特異性不強,建議使用特異性強的抗體;
5、抗體孵育時間過久,建議減少抗體孵育時間;
6、二抗與抗原有交叉反應,建議選擇合適的封閉物;
7、二聚體或多聚體存在,建議增加蛋白質變性過程及強度;
8、底物顯色與曝光時間過長,建議縮短顯色及曝光的時間。
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