糖化酶,即葡萄糖淀粉酶(EC3.2.1.3),又稱γ-淀粉酶,是一種外切型糖苷酶,它從淀粉的非還原性末端水解α-1,4糖苷鍵和α-1,6糖苷鍵,將淀粉完全水解為葡萄糖,因此廣泛的應用于酒精、白酒、抗生素、氨基酸、有機酸,甘油,淀粉糖等工業中,是我國重要的工業酶制劑之一。本試劑盒提供了一種簡單易用的比色法,用于分析生物樣品中糖化酶的活性。其原理是糖化酶水解可溶性淀粉生成葡萄糖,與3,5-二硝基水楊酸生成紅棕色化合物,在540nm處有大光吸收,在一定范圍內反應液顏色深淺與葡萄糖的量成正比,可測定葡萄糖的量來計算得糖化酶的活力。
酶標儀或可見分光光度計(能測540nm處的吸光度)
96孔板或微量玻璃比色皿,可調節式移液槍及槍頭
制冰機,離心機,水浴鍋
去離子水
勻漿器
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答:可能的原因有:
1、目的蛋白有多個修飾位點,本身可以呈現多條帶,建議查閱文獻或進行生物信息學分析,獲得蛋白序列的修飾位點信息,通過去修飾確定蛋白實際大小;
2、樣本處理過程中目的蛋白發生降解,建議加入蛋白酶抑制劑;樣本處理時在冰上操作;
3、雜蛋白多,建議處理目的蛋白;
4、抗體特異性不強,建議使用特異性強的抗體;
5、抗體孵育時間過久,建議減少抗體孵育時間;
6、二抗與抗原有交叉反應,建議選擇合適的封閉物;
7、二聚體或多聚體存在,建議增加蛋白質變性過程及強度;
8、底物顯色與曝光時間過長,建議縮短顯色及曝光的時間。
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