β-木糖苷酶(EC3.2.1.37)存在于植物、細(xì)菌和真菌等生物體,是催化木聚糖類半纖維素降解的關(guān)鍵酶,產(chǎn)物木糖可作為碳源應(yīng)用于微生物發(fā)酵。另外,β-木糖苷酶還可以作為生物漂白劑應(yīng)用于造紙工業(yè),比傳統(tǒng)的漂白法環(huán)保,具有廣泛的應(yīng)用價(jià)值。本試劑盒提供了一種簡(jiǎn)單易用的比色法,用于分析各種生物樣品中β-木糖苷酶的活性。其原理是β-木糖苷酶催化對(duì)硝基苯酚-β-D-木糖苷產(chǎn)生對(duì)硝基苯酚,對(duì)硝基苯酚在400nm處有特征吸收峰,測(cè)定400nm光吸收增加速率,可計(jì)算β-木糖苷酶活性。
酶標(biāo)儀或可見(jiàn)光分光光度計(jì)(能測(cè)400nm處的吸光度)及恒溫箱
96孔板或微量玻璃比色皿、可調(diào)節(jié)式移液槍及槍頭
離心機(jī)、制冰機(jī)
去離子水
勻漿器(如果是組織樣本)
更新中...
答:可能的原因有:
1、目的蛋白有多個(gè)修飾位點(diǎn),本身可以呈現(xiàn)多條帶,建議查閱文獻(xiàn)或進(jìn)行生物信息學(xué)分析,獲得蛋白序列的修飾位點(diǎn)信息,通過(guò)去修飾確定蛋白實(shí)際大??;
2、樣本處理過(guò)程中目的蛋白發(fā)生降解,建議加入蛋白酶抑制劑;樣本處理時(shí)在冰上操作;
3、雜蛋白多,建議處理目的蛋白;
4、抗體特異性不強(qiáng),建議使用特異性強(qiáng)的抗體;
5、抗體孵育時(shí)間過(guò)久,建議減少抗體孵育時(shí)間;
6、二抗與抗原有交叉反應(yīng),建議選擇合適的封閉物;
7、二聚體或多聚體存在,建議增加蛋白質(zhì)變性過(guò)程及強(qiáng)度;
8、底物顯色與曝光時(shí)間過(guò)長(zhǎng),建議縮短顯色及曝光的時(shí)間。
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