木聚糖酶(EC 3.2.1.8)主要由微生物產生,能催化水解木聚糖,也被稱為戊聚糖酶或半纖維素酶,可分解釀造或飼料工業中的原料細胞壁以及β-葡聚糖,降低釀造中物料的粘度,促進有效物質的釋放,以及降低飼料中的非淀粉多糖,促進營養物質的吸收利用,因而廣泛的應用于釀造和飼料工業中,堿性木聚糖酶(Basic Xylanase,BAX)一般分離自適生長pH為9-11的微生物。本試劑盒可檢測各種生物樣本中BAX活性,其原理是BAX在堿性環境中催化木聚糖降解成還原性寡糖和單糖,在沸水浴條件下進一步與3,5-二硝基水楊酸發生顯色反應,在540nm處有特征吸收峰,反應液顏色的深淺與酶解產生的還原糖量成正比,通過測定反應液在540nm吸光值增加速率,可計算BAX活力。
酶標儀或可見分光光度計(能測540nm處的吸光度)以及水浴鍋
96孔板或微量玻璃比色皿,可調節式移液槍及槍頭
低溫離心機,制冰機
去離子水
勻漿器(如果是組織樣本)
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答:可能的原因有:
1、目的蛋白有多個修飾位點,本身可以呈現多條帶,建議查閱文獻或進行生物信息學分析,獲得蛋白序列的修飾位點信息,通過去修飾確定蛋白實際大小;
2、樣本處理過程中目的蛋白發生降解,建議加入蛋白酶抑制劑;樣本處理時在冰上操作;
3、雜蛋白多,建議處理目的蛋白;
4、抗體特異性不強,建議使用特異性強的抗體;
5、抗體孵育時間過久,建議減少抗體孵育時間;
6、二抗與抗原有交叉反應,建議選擇合適的封閉物;
7、二聚體或多聚體存在,建議增加蛋白質變性過程及強度;
8、底物顯色與曝光時間過長,建議縮短顯色及曝光的時間。
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