α-L-阿拉伯呋喃糖苷酶(α-L-Arabinofuranosidase,α-L-Af)屬于糖基水解酶家族,是一種能夠水解非還原呋喃阿拉伯糖殘基的糖苷酶類。α-L-Af可以從含有阿拉伯糖殘基的多聚物如細胞壁阿拉伯木聚糖、阿拉伯聚糖和阿拉伯半乳聚糖等中性糖的非還原末端水解生成一個 L-阿拉伯糖分子,促使這些中性糖不斷解離,促進果膠的增溶和降解。由于果實成熟過程中常常伴隨著阿拉伯糖的喪失,該酶活性在果實成熟軟化中具有重大意義。本試劑盒提供了一種簡單易用的比色法,用于分析各種生物樣品中α-L-Af的活性。其原理是α-L-Af 分解對硝基苯基-α-L-阿拉伯呋喃糖苷生成對-硝基苯酚,對-硝基苯酚在 400 nm 處有大吸收峰,通過測定 400 nm 處吸光值變化可計算得α-L-Af 活性。
酶標儀或可見光分光光度計(能測400nm處的吸光度)及恒溫箱
96孔板或微量玻璃比色皿、可調節式移液槍及槍頭
離心機、制冰機
去離子水
勻漿器(如果是組織樣本)
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答:可能的原因有:
1、目的蛋白有多個修飾位點,本身可以呈現多條帶,建議查閱文獻或進行生物信息學分析,獲得蛋白序列的修飾位點信息,通過去修飾確定蛋白實際大小;
2、樣本處理過程中目的蛋白發生降解,建議加入蛋白酶抑制劑;樣本處理時在冰上操作;
3、雜蛋白多,建議處理目的蛋白;
4、抗體特異性不強,建議使用特異性強的抗體;
5、抗體孵育時間過久,建議減少抗體孵育時間;
6、二抗與抗原有交叉反應,建議選擇合適的封閉物;
7、二聚體或多聚體存在,建議增加蛋白質變性過程及強度;
8、底物顯色與曝光時間過長,建議縮短顯色及曝光的時間。
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